Стабилизатор ld50: LD1117S50CTR, LDO-регулятор напряжения, +5В, 0.8А [SOT-223]

Стабилизатор напряжения | Описание работы, схема подключения.

Стабилизатор напряжения – важнейший радиоэлемент современных радиоэлектронных устройств. Он обеспечивает постоянное напряжение на выходе цепи, которое почти не зависит от нагрузки.

Стабилизаторы семейства LM

В нашей статье мы  рассмотрим стабилизаторы напряжения семейства LM78ХХ. Серия 78ХХ выпускается в металлических корпусах  ТО-3 (слева)  и в пластмассовых корпусах ТО-220 (справа). Такие стабилизаторы имеют три вывода: вход, земля (общий) и вывод.

Вместо “ХХ” изготовители указывают напряжение стабилизации, которое нам будет выдавать этот стабилизатор. Например, стабилизатор 7805 на выходе будет выдавать 5 Вольт, 7812 соответственно 12 Вольт, а 7815 – 15 Вольт. Все очень просто.

Схема подключения

А вот и схема подключения таких стабилизаторов. Эта схема подходит ко всем стабилизаторам семейства 78ХХ.

На схеме мы видим два конденсатора, которые запаиваются с каждой стороны. Это минимальные значения конденсаторов, можно, и даже желательно поставить большего номинала. Это требуется для уменьшения пульсаций как  по входу, так и по выходу. Кто забыл, что такое пульсации, можно заглянуть в статью как получить из переменного напряжения постоянное.

Характеристики стабилизаторов

Какое же напряжение подавать, чтобы стабилизатор работал как надо? Для этого ищем даташит на стабилизаторы и внимательно изучаем. Нас интересуют вот эти характеристики:

Output voltage – выходное напряжение

Input voltage – входное  напряжение

Ищем наш 7805. Он выдает нам выходное напряжение 5 Вольт. Желательным входным напряжением производители отметили напряжение в 10 Вольт. Но, бывает так, что выходное стабилизированное напряжение иногда бывает или чуть занижено, или чуть завышено.

Для электронных безделушек доли вольт не ощущаются, но для прецизионной (точной) аппаратуры лучше все таки собирать свои схемы. Здесь мы видим, что стабилизатор 7805 может нам выдать одно из напряжений диапазона 4,75 – 5,25 Вольт, но при этом должны соблюдаться условия (conditions), что ток на выходе в нагрузке не будет превышать 1 Ампера. Нестабилизированное постоянное напряжение может “колыхаться” в диапазоне от 7,5  и до 20 Вольт, при это на выходе будет всегда 5 Вольт.

Рассеиваемая мощность на стабилизаторе может достигать до 15 Ватт – это приличное значение для такой маленькой радиодетали. Поэтому, если нагрузка на выходе такого стабилизатора будет кушать приличный ток, думаю, стоит подумать об  охлаждении стабилизатора. Для этого ее надо посадить через пасту КПТ на радиатор. Чем больше ток на выходе стабилизатора, тем больше по габаритам должен быть радиатор. Было бы вообще идеально, если бы радиатор еще обдувался вентилятором.

Работа стабилизатора на практике

Давайте рассмотрим нашего подопечного, а именно, стабилизатор LM7805. Как вы уже поняли, на выходе мы должны получить 5 Вольт стабилизированного напряжения.

Соберем его по схеме

Берем нашу Макетную плату  и быстренько собираем выше предложенную схемку подключения. Два желтеньких  – это конденсаторы, хотя их ставить необязательно.

Итак,  провода 1,2 – сюда мы загоняем нестабилизированное входное постоянное напряжение, снимаем 5 Вольт с проводов 3 и 2.

[quads id=1]

На Блоке питания мы ставим напряжение в диапазоне 7,5 Вольт и  до 20 Вольт. В данном случае я поставил напряжение 8,52 Вольта.

И что же у нас получилось на выходе данного стабилизатора? 5,04 Вольта! Вот такое значение мы получим на выходе этого стабилизатора, если будем подавать напряжение в диапазоне от 7,5 и до 20 Вольт. Работает великолепно!

Давайте проверим еще один наш стабилизатор. Думаю, Вы уже догадались, на сколько он вольт.

Собираем его по схеме выше и замеряем входное напряжение. По даташиту можно подавать на него входное напряжение  от 14,5 и до 27 Вольт. Задаем 15 Вольт с копейками.

А вот и напряжение на выходе. Блин, каких то 0,3 Вольта не хватает для 12 Вольт. Для радиоаппаратуры, работающей от 12 Вольт это не критично.

Как сделать блок питания на 5, 9,12  Вольт

Как же сделать простой и высокостабильный источник питания на 5, на 9 или даже на 12 Вольт?  Да очень просто. Для этого Вам нужно прочитать вот эту статейку и поставить на выход стабилизатор на радиаторе! И все! Схема будет приблизительно вот такая для блока питания 5 Вольт:

Два электролитических конденсатора для  для устранения пульсаций и высокостабильный блок питания на 5 вольт к вашим услугам! Чтобы получить блок питания на большее напряжение, нам нужно также на выходе трансформатора тоже получить большее напряжение. Стремитесь, чтобы на конденсаторе С1 напряжение было не меньше, чем в даташите на описываемый  стабилизатор.

Для того, чтобы стабилизатор напряжения не перегревался, подавайте на вход минимальное напряжение, указанное в даташите. Например, для стабилизатора 7805 это напряжение равно 7,5 Вольт,  а для стабилизатора 7812 желательным входным напряжением можно считать напряжение в 14,5 Вольт. Это связано с тем, разницу напряжения, а следовательно и мощность, стабилизатор будет рассеивать на себе.

Как вы помните, формула мощности P=IU, где U – напряжение, а  I – сила тока. Следовательно, чем больше входное напряжение стабилизатора, тем больше мощность, потребляемая им. А излишняя мощность – это и есть нагрев. В результате нагрева такой стабилизатор может перегреться и войти в состояние защиты, при котором дальнейшая работа стабилизатора прекращается или вовсе сгореть.

Заключение

Все большему числу электронных  устройств требуется качественное стабильное питание без всяких скачков напряжения. Сбой того или иного модуля электронной аппаратуры может привести к неожиданным и не очень приятным последствиям.  Используйте же  на здоровье достижения электроники, и не парьтесь по поводу питания своих электронных безделушек.

Где купить стабилизатор напряжения

Купить дешево эти интегральные стабилизаторы можно сразу целым набором на Алиэкспрессе по этой ссылке. Здесь есть абсолютно любые значения даже для отрицательного напряжения.


А в видео можете посмотреть как сделать самый простой стабилизатор на LM 317:

smd-код ld

Подробная информация о производителях - в GUIDE'е, о типах корпусов - здесь
коднаименованиефункциякорпуспроизводительпримечания
LDBAT43W-Gдиод Шоттки: 30В/200мАsod123VishayGreen
LDxHBL5006P2T5Gшунтирующий тиристор для СИДsod923ON Semix - date-код
LD##MCP9800A0T-M/OTцифровой датчик температуры i2c: ±1°C адрес=000sot23-5Microchip## - lot-код
LD##PIC10F320-E/OTмикроконтроллер autosot23-6Microchip## - lot-код
LDxx#AX6603-150BT|Z6LDO-стабилизатор: 1,5В/300мАtsot23-5|tdfn-6lAxelitexx# - date-|lot-код
Ldxx#AX6603-350BT|Z6LDO-стабилизатор: 3,5В/300мАtsot23-5|tdfn-6lAxelitexx# - date-|lot-код
LD12LD1117S12LDO стабилизатор 1.2В/1Аsot223STM
LD12ALD1117AS12LDO стабилизатор 1.2В/1Аsot223STM
LD12CLD1117S12CLDO стабилизатор 1.2В/1Аsot223STM
LD18LD1117S18LDO стабилизатор 1.8В/1Аsot223STM
LD18ALD1117AS18LDO стабилизатор 1.8В/1Аsot223STM
LD18CLD1117S18CLDO стабилизатор 1. 8В/1Аsot223STM
LD25LD1117S25LDO стабилизатор 2.5В/1Аsot223STM
LD33LD1117S33LDO стабилизатор 3.3В/1Аsot223/so8STM
LD33ALD1117AS33LDO стабилизатор 3.3В/1Аsot223STM
LD33CLD1117S33CLDO стабилизатор 3.3В/1Аsot223/so8STM
LD50LD1117S50LDO стабилизатор 5.0В/1Аsot223/so8STM
LD50ALD1117AS50
LDO стабилизатор 5.0В/1А
sot223STM
LD50CLD1117S50CLDO стабилизатор 5.0В/1Аsot223/so8STM
LD9ADP2108AUJZ|ACBZ-3.0понижающий dc-dc: 3В/600мА/3МГц +Ltsot5|wlcsp5ADI
LDAADP3338RT-2.85LDO стабилизатор 2.85Вsot223ADI
LDBADP3300ART-3.3LDO стабилизатор 3.3Вsot23-6ADI
LDCADP3309ART-2.5LDO стабилизатор 3.3Вsot23-5ADI
LDJP6SMB18сапрессор 600W: 18ВsmbTSC
LDSADP150AUJZ-1.8LDO: 1,8В/150мАtsot5ADI
LDUBLP3981IMM-2.
83
LDO стабилизатор 2.83В/300мАmsop8TI
LDWXLTC6990*DCBVCO:448кГц...2МГцdfn6LTC* - T°grade
LDWZLTC6991*DCBНЧ генератор: 1мс...9,5часdfn6LTC* - T°grade
LDXCLTC6992*DCB-1ШИМ-модулятор:3,81Гц...1МГцdfn6LTC* - T°grade
LDXFLTC6992*DCB-2ШИМ-модулятор:3,81Гц...1МГцdfn6LTC* - T°grade
LDXHLTC6993*DCB-1моностабильный генератор имульсов: 1мкс...33,6с запуск фронтомdfn6LTC* - T°grade
LDXKLTC6993*DCB-2моностабильный генератор имульсов: 1мкс...33,6с запуск фронтом/перезапускdfn6LTC* - T°grade
LDZADP150AUJZ-2.5
LDO: 2,5В/150мА
tsot5ADI

LD SMD МАРКИРОВКА


LD

BAT43W-G

диод Шоттки: 30В/200 мА

sod123

Vishay

LDx

HBL5006P2T5G

шунтирующий тиристор для LED

sod923

ON Semi

LD##

MCP9800A0T-M/OT

цифровой датчик температуры i2c: ±1°C адрес=000

sot23-5

Microchip

LD##

PIC10F320-E/OT

микроконтроллер auto

sot23-6

Microchip

LDxx#

AX6603-150BT|Z6

LDO-стабилизатор: 1,5В/300 мА

tsot23-5|tdfn-6l

Axelite

Ldxx#

AX6603-350BT|Z6

LDO-стабилизатор: 3,5В/300 мА

tsot23-5|tdfn-6l

Axelite

LD12

LD1117S12

LDO стабилизатор 1. 2В/1 А

sot223

STM

LD12A

LD1117AS12

LDO стабилизатор 1.2В/1 А

sot223

STM

LD12C

LD1117S12C

LDO стабилизатор 1.2В/1 А

sot223

STM

LD18

LD1117S18

LDO стабилизатор 1.8В/1 А

sot223

STM

LD18A

LD1117AS18

LDO стабилизатор 1.8В/1 А

sot223

STM

LD18C

LD1117S18C

LDO стабилизатор 1.8В/1 А

sot223

STM

LD25

LD1117S25

LDO стабилизатор 2.5В/1 А

sot223

STM

LD33

LD1117S33

LDO стабилизатор 3.3В/1 А

sot223/so8

STM

LD33A

LD1117AS33

LDO стабилизатор 3.3В/1 А

sot223

STM

LD33C

LD1117S33C

LDO стабилизатор 3.3В/1 А

sot223/so8

STM

LD50

LD1117S50

LDO стабилизатор 5.0В/1 А

sot223/so8

STM

LD50A

LD1117AS50

LDO стабилизатор 5.0В/1 А

sot223

STM

LD50C

LD1117S50C

LDO стабилизатор 5. 0В/1 А

sot223/so8

STM

LDA

ADP3338RT-2.85

LDO стабилизатор 2.85 В

sot223

ADI

LDB

ADP3300ART-3.3

LDO стабилизатор 3.3 В

sot23-6

ADI

LDC

ADP3309ART-2.5

LDO стабилизатор 3.3 В

sot23-5

ADI

LDJ

P6SMB18

сапрессор 600W: 18 В

smb

TSC

LDS

ADP150AUJZ-1.8

LDO: 1,8 В/150 мА

tsot5

ADI

LDUB

LP3981IMM-2.83

LDO стабилизатор 2.83 В/300 мА

msop8

TI

LDWX

LTC6990*DCB

VCO:448 кГц...2 МГц

dfn6

LTC

LDWZ

LTC6991*DCB

НЧ генератор: 1мс...9,5 час

dfn6

LTC

LDXC

LTC6992*DCB-1

ШИМ-модулятор:3,81 Гц...1 МГц

dfn6

LTC

LDXF

LTC6992*DCB-2

ШИМ-модулятор:3,81 Гц...1 МГц

dfn6

LTC

LDXH

LTC6993*DCB-1

моностабильный генератор имульсов: 1 мкс...33,6с

dfn6

LTC

LDXK

LTC6993*DCB-2

моностабильный генератор имульсов: 1мкс. ..33,6с

dfn6

LTC

LDZ

ADP150AUJZ-2.5

LDO: 2,5 В/150 мА

tsot5

ADI

Почему греется стабилизатор напряжения?

Стабилизатор напряжения — это прибор, основной частью которого является трансформатор. При работе любой трансформатор выделяет тепло. Однако, сильно греться стабилизатор напряжения не должен. Более того, существенный перегрев для стабилизатора может быть опасен, он может привести к поломке прибора и даже возгоранию.

Внешняя часть стабилизатора напряжения не должна существенно нагреваться, это нарушает требование пожарной безопасности. Внутренние комплектующие могут нагреваться до 70—80 градусов. Хорошо спроектированный стабилизатор напряжения не должен допускать перегрева и внутренних комплектующих, так как это приводит к их быстрому износу и поломке.

На практике многие китайские стабилизаторы напряжения сильно греются. Происходит это по двум причинам. Вот первая причина. Китайские производители просто экономят на комплектующих, устанавливают менее мощные элементы, что и приводит к дополнительному нагреву. Вторая причина лежит в области технического регулирования. В Китае нет ГОСТов или других стандартов, которые ограничивают температуру элементов бытовой техники. Нельзя сказать, что они нарушают требования обязательных стандартов, у них просто нет таких регуляторов.

Причиной нагревания стабилизатора сетевого напряжения может быть перегрузка, то есть к стабилизатору подключена нагрузка больше номинальной мощности стабилизатора.

Еще одной причиной может быть указание производителем стабилизатора напряжения завышенного значения мощности стабилизатора. Как правило, китайские производители (а также Российские и Прибалтийские, которые имеют только название торговой марки, а производятся стабилизаторы в Китае), завышают этот показатель в два раза. При низких значениях напряжения эти стабилизаторы выдают мощность значительно ниже номинальной.

Стабилизатор напряжения может перегреваться в случае нарушения процесса охлаждения стабилизатора. Это может быть поломка вентилятора охлаждения или закрытие мусором вентиляционных каналов и радиаторов охлаждения.

Если описанные выше причины не являются причиной перегрева стабилизатора напряжения, то такой прибор обязательно нужно отправить в ремонт. Использование испорченного стабилизатора сетевого напряжения опасно.

Подробные ответы вы можете найти в следующих статьях.

Чем опасны дешевые китайские стабилизаторы сетевого напряжения
Сравнение реальных мощностей стабилизаторов напряжения разных марок
Сравнение стабилизаторов напряжения Ресанта, APC, Voltron, Калибри, Teplocom

Оловоорганические стабилизаторы ПВХ

Соединения Sn4+, преимущественно строения R2SnX2, где R - метил, бутил, октил, бензил и т. п., а Х - карбокси-, алкокси-, меркапто- и некоторые другие заместители, являются высокоэффективными стабилизаторами. Оловоорганические стабилизаторы (ООС) применяются в тех случаях, когда требуется, например, отличная прозрачность изделий в сочетании с высокой термостойкостью; часто они выполняют функции свето-, механо- и биохимических стабилизаторов, пластификаторов и др.

Следует отметить, что работа с ООС связана с рядом трудностей технологического характера, обусловленных часто их недостаточной совместимостью, склонностью к выпотеванию, необходимостью специального подбора лубрикантов, выделением в некоторых случаях летучих продуктов с неприятным запахом.

Стабилизирующее действие.

Многофункциональность действия ООС проявляется в способности связывать свободный НС1, ингибировать термо- и термоокислительный распад ПВХ, ингибировать радикальные реакции в полимере и сшивание макроцепей, блокировать активные центры роста ППС и тем самым замедлять изменение окраски при распаде ПВХ, заметно снижать и стабилизировать вязкость расплава композиций и пр.

Химическое строение.

Химическое строение ООС определяет их эффективность и токсичность. Наиболее эффективны диалкилпроизводные Sn, в первую очередь бутильные производные. Три- и .моноалкилпроизводные используются много реже, преимущественно для специальных целей.

Производные диалкилолова, содержащие атомы S, непосредственно не связанные с атомом Sn, характеризуются большей эффективностью, чем ООС с меркапто- или ненасыщенными карбоксизаместителями. Относительно менее эффективны ООС с насыщенными кислотными заместителями.

Наименее физиологически опасными признаны производные диоктил-, дибензилолова, а также моноалкилолова. В ряде стран (США, Франция, Италия, Англия, Германия и др.) они используются в качестве стабилизаторов при получении жестких упаковочных материалов для пищевых и медицинских продуктов. Например, LD50 у дилауратдиоктилолова на 5,4*10-3 кг/кг, а у ди-н-октилолово-бис-тиогликолята - на 1,4*10-3 кг/кг выше, чем у соответствующих бутильных производных. Производные дибензил-олова по токсичности сравнимы с производными диоктилолова. LD50 монобутил-трис(2-этилгексилгликолята) равна 3,5*10-3 кг/кг, тогда как у дибутилолово-бис(2-этилгексилгликолята) LD50=0,6*10-3 кг/кг. Соединения R3SnX характеризуются повышенной токсичностью, но в ряде случаев используются в качестве пестицидных добавок к ПВХ.

Оловоорганические стабилизаторы, не содержащие серу.

Оловоорганические стабилизаторы, не содержащие серу, недостаточно эффективны как ТС и обычно сочетаются с серосодержащими ООС и некоторыми синергистами (эпоксисоединения, соли жирных кислот и др.). Наиболее распространены ООС лауриновой и малеиновой кислот.

Дибутилоловодилаурат, а также диоктилоловодилаурат обладают светостабилизирующим и смазывающим действием, а как акцепторы НС1 пригодны лишь для непродолжительной переработки композиций при температуре, не превышающей 167 0С. Увеличить эффективность этой группы ТС, а следовательно, и повысить температуру переработки ПВХ можно путем сочетания алкилоловолауратов с солями жирных кислот Pb, Cd, с ТС типа диалкилоловомалеината или серосодержащих ООС эпоксисоединениями. Диоктилоловодилаурат менее эффективен и хуже совместим с ПВХ, чем бутильное производное. Возможно использование диалдилоловодилауратов для получения прозрачных изделий из пластизолей и органозолей.

Дибутилоловомалеат, а также продукты на основе диоктилоловомалеата, диоктилоловодималеата или ТС, относящиеся к этому типу, более эффективны, чем диалкилоловодилаураты. Композиции, стабилизированные этими ООС, можно перерабатывать при более высоких температурах преимущественно в жесткие прозрачные (при ограниченной концентрации) или непрозрачные изделия, к которым предъявляются повышенные требования по тону окраски. Недостаточный смазывающий эффект малеатов требует специального подбора лубрикантов. По этой же причине малеаты часто используют совместно с диалкилоловодилауратами, поэтому специально производят смешанные ТС, например бис(ди-к-алкилмонолауратолово)малеат, лауратмалеат Sn в сочетании с антиоксидантами. Применяют также оловоорганические эфиры малеиновой кислоты, например диалкилолово ди-изо-бутилмалеат, дибутилолово ди-моно-2-этилгексилмалеат, ди-изо-бутилолово-.бис-октилмалеат-стеарат; оловоорганические производные карбоновых кислот и спиртов, например дибутилмонометоксиоловометилмалеат, и др.

Оловоорганические стабилизаторы, содержащие серу.

К числу наиболее известных стабилизаторов этой группы относятся диалкилоловодиалкилмеркаптиды, в частности дибутилоловомеркаптиды и диметилоловомеркаптиды:. Интересны полимерные ООС общей формулы

[—СО—СН2—СН2—S—Sn(R) 2—S-СН2—СН2—СО—О—]n (n = 4 - 8)

при использовании которых материалы не окрашиваются при контакте с соединениями Pb, Sb, Cd, Сa, как это наблюдается для большинства других серосодержащих ООС.

Эффективными ТС являются эфиры тиогликолевой кислоты. Бистиогликолевые эфиры бутилолова обладают пластифицирующим действием, что облегчает переработку ПВХ, однако они способны увеличивать хрупкость жестких материалов.

Октильные производные серосодержащих ООС (Thermolite 890) в определенных концентрациях используются для производства материалов, предназначенных для упаковки пищевых продуктов и для медицинских целей. Следует учитывать, что хотя серосодержащие ООС более эффективно защищают ПВХ при переработке, чем ООС, не содержащие серу, тем не менее они уступают последним в светостойкости. Поэтому для изготовления различных атмосферостойких термостабильных материалов применяют смеси содержащих и не содержащих серу ООС в сочетании со стабилизаторами — УФ-абсорберами, обычно производными бензотриазола.

L.D. 50

2. Музыка и тексты песен

Альбом L.D. 50 включает в себя технический стиль музыки, который сама группа охарактеризовала как маткор. Музыкальный стиль Mudvayne был вдохновлён следующими музыкальными направлениями: дэт-метал, хардкор-панк, джаз-фьюжн, спид-метал и хип-хоп.

Также можно заметить влияние на музыку группы таких рок- и метал-исполнителей, как Obituary, Emperor, Motley Crue, Alice in Chains, Pearl Jam, King Crimson, Porcupine Tree и Metallica. Однако группа заявляла, что они не находились под влиянием разных метал-групп. Заглавная композиция альбома, "Monolith", относится к фильму Стэнли Кубрика "Космическая одиссея 2001 года". Группа находилась под очень сильным влиянием этого фильма во время написания L.D. 50.

В процессе написания песен участники группы соединяли гитарные риффы с текстами песен, основанными на том, что Мэтью Макдоноу назвал "символикой чисел". По словам Макдоноу, в то время как он и Чед Грэй писали текст песни "Nothing to Gein", Грег Триббетт исполнил рифф, который чередовался в 4 и 5 барах. Поскольку число 9 - это лунное число, Макдоноу чувствовал, что рифф будет соответствовать лирике песни, которая ссылалась на серийного убийцу и чёрного копателя Эда Гина, чьи действия Макдоноу связал с ночной деятельностью. История Гина привлекла внимание Макдоноу и Грэя, когда они листали книгу об убийцах и истинном преступлении. Что касается Гина, Макдоноу прокомментировал:

Казалось настолько невозможным для Гина преодолеть разрыв в основном обществе. Я нашел это захватывающим, что я мог найти человечность в нём.

Название альбома происходит от термина "полулетальная доза", которую используют токсикологи для обозначения дозы, необходимой для гибели половины 50 % членов испытуемой группы, и обозначается она как ЛД 50. Звуковой коллаж под названием "L.D. 50", составленный и записанный MjDawn, появляется на альбоме как серия интерлюдий. Полный кусок появился в качестве бонус-трека на альбоме The Beginning of All Things to End - переиздание мини-альбома Kill, I Oughtta. В альбоме также представлены искаженные аудиофайлы, озвученные американским философом и психонавтом Теренсом Маккенной, который умер примерно во время записи альбома.

Музыкальный стиль L.D. 50 был в первую очередь охарактеризован как хэви-метал альбом или один из его поджанров. AllMusic описал альбом, помимо хэви-метала, как трэш-метал альбом, Exclaim! описал альбом как нью-метал, а журнал Spin описал альбом как имеющий звуки "фьючер-прога". В книге "Грубый гид по хэви-металу" звучание альбома был описан как арт-метал.

ACUMER 2000 | Ataman Kimya A.Ş.

Метатеги: acumer 2000, th 2000, антискалант, антискалан, диспергатор, дисперсан, cas no: 9003-04-7, карбоксилат, сульфонат, кополимер

Acumer 2000 - превосходный стабилизатор фосфатов и цинка, а также диспергатор неорганических частиц для составов для обработки охлаждающей воды против накипи и коррозии.

Ингибитор образования накипи и диспергатор
Cas №: 9003-04-7
Сополимер карбоксилата / сульфоната
Антискалановый диспергатор / дисперсия аджани

Сополимер ACUMER 2000 сочетает в себе две функциональные группы: сильную кислоту (сульфонат) и слабую кислоту (карбоксилат), которые обеспечивают оптимальную эффективность защиты от накипи / диспергирования за счет различных механизмов.
Полимер ACUMER 2000 разработан для обеспечения превосходной стабилизации фосфата кальция.
Он также демонстрирует отличную стабилизацию карбоната цинка и кальция. Кроме того, ACUMER 2000 является сильным диспергатором, удерживающим ил и часто встречающиеся неорганические частицы во взвешенном состоянии и предотвращающим их осаждение на теплопередающих поверхностях.

Фосфаты и цинк-стабилизатор для составов для обработки воды против накипи и коррозии. Он усиливает ингибирование коррозии и действует как превосходный диспергатор ила.

Использование: Промышленная очистка воды.

Преимущества: Отличное ингибирование образования накипи для различных применений, включая контуры охлаждения, котлы и установки обратного осмоса.

Контроль / ингибирование образования отложений: карбонат кальция, фосфат / фосфонат кальция

ФИЗИЧЕСКИЕ И ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА

Решение Aspect Clear
Химическая природа Сополимер карбоксилата и сульфоната
Средняя молекулярная масса: 4500 (Mw)
Общее содержание твердых веществ: (%): 43
pH как есть (при 25 ° C): 4
Насыпная плотность (при 25 ° C): 1,21
Вязкость по Брукфилду: 400


ХИМИЯ И СПОСОБ ДЕЙСТВИЯ
Сополимер ACUMER 2000 сочетает в себе две функциональные группы: сильную кислоту (сульфонат) и слабую кислоту (карбоксилат), которые обеспечивают оптимальную эффективность защиты от накипи / диспергирования за счет следующих различных механизмов:
• Повышение растворимости за счет порогового эффекта, который снижает осаждение низкорастворимых неорганических солей.
• Модификация кристаллов, которая деформирует растущий кристалл неорганической соли с образованием мелких, неправильных, легко ломающихся кристаллов, которые плохо прилипают к поверхности и могут быть легко удалены во время операций очистки.
• Диспергирующая способность, которая предотвращает агломерацию и осаждение осажденных кристаллов или других неорганических частиц на поверхности.
Сульфонатные группы увеличивают отрицательный заряд карбоксилатных групп, адсорбированных на частицах, и к тому времени усиливают отталкивание между частицами, предотвращая их агрегацию в более крупные частицы, которые могут оседать и осаждаться на поверхностях труб и областях с низким расходом.

СТАБИЛИЗАЦИЯ / ДИСПЕРСАНТНОСТЬ
Полимер ACUMER 2000 разработан для обеспечения превосходной стабилизации фосфата кальция.
Он также демонстрирует отличную стабилизацию карбоната цинка и кальция.
Кроме того, ACUMER® 2000 является сильным диспергатором, удерживая во взвешенном состоянии ил и часто встречающиеся неорганические частицы, а также предотвращая их осаждение на теплопередающих поверхностях.

ПРИЛОЖЕНИЯ
• Стабилизатор / полимер, предотвращающий образование накипи, для обработки охлаждающей воды.
Благодаря преимуществам всех дополнительных свойств и высокой эффективности в качестве стабилизатора, антиалентного и диспергатора, ACUMER 2000 особенно рекомендуется для большинства программ очистки охлаждающей воды:
- Программы на основе фосфатов.
- Программы на основе цинка.
- Расширены все органические программы, в которых
ACUMER 2000 способствует нанесению ингибиторов коррозии на металлические поверхности.
ACUMER 2000 имеет синергетический эффект с другими добавками, предотвращая образование накипи и коррозии.

ПРЕИМУЩЕСТВА ACUMER 2000
- Обладает превосходной термической и химической стабильностью и может использоваться и храниться в широком диапазоне температур и pH.
Эта стабильность позволяет разработчику рецептур производить препараты в одной упаковке при высоком pH для максимального срока хранения.
- Обеспечивает превосходную устойчивость к железу, когда большинство коммерчески доступных полимеров дезактивировано в присутствии растворимого железа в системе.
- Содержит поверхности в чистоте, обеспечивая максимальную теплоотдачу и устойчивость к коррозии.


МЕТОД ИСПЫТАНИЯ
ACUMER 2000 можно анализировать в рабочей концентрации с помощью набора для анализа полиакрилата Hach. В этом комплекте используется запатентованный метод, разработанный Rohm and Haas.

ИНФОРМАЦИЯ О БЕЗОПАСНОМ ОБРАЩЕНИИ
• Осторожно: - Контакт может вызвать раздражение глаз и легкое раздражение кожи.
• Меры первой помощи
- Контакт с кожей: тщательно промыть кожу водой с мылом. Перед повторным ношением снимите загрязненную одежду и белье.
- Попадание в глаза: промыть глаза большим количеством воды не менее 15 минут, а затем вызвать врача.
- При проглатывании: если пострадавший в сознании, разбавьте жидкость, напоив его водой, а затем вызовите врача.
Если пострадавший без сознания, немедленно вызовите врача. Никогда не давайте пить человеку без сознания.
• Токсичность: - Крысы с острым пероральным приемом (LD50):> 5 г / кг.


ACUMER ™ 2000 - это превосходный стабилизатор фосфатов и цинка и диспергатор неорганических частиц для обработки охлаждающей воды против накипи / коррозии f


Используется в:

Очистка воды
Охлаждающая вода
Обратный осмос
Промышленное и питьевое
Преимущества

Предотвратить образование отложений на поверхностях теплопередачи
Предотвращение неорганического загрязнения и образования отложений
Стабилизирует ингибиторы коррозии, такие как цинк, фосфаты и фосфонаты.
Сертификат NSF-60 для питьевой воды обратного осмоса
Подавляет осаждение солей кальция, магния и железа.
Типичные свойства

Эти свойства являются типичными, но не являются спецификациями.

Химия и способ действия
Сополимер ACUMER 2000 сочетает в себе две функциональные группы: сильную кислоту (сульфонат) и слабую кислоту (карбоксилат), которые обеспечивают оптимальную эффективность защиты от накипи / диспергирования за счет следующих различных механизмов:

Повышение растворимости за счет порогового эффекта, который снижает осаждение малорастворимых неорганических солей.
Модификация кристаллов, которая деформирует растущий кристалл неорганической соли с образованием мелких, неправильных, легко разрушаемых кристаллов, которые плохо прилипают к поверхности и могут быть легко удалены во время операций очистки.
Диспергирующая активность, которая предотвращает агломерацию и осаждение осажденных кристаллов или других неорганических частиц на поверхности. Сульфонатные группы увеличивают отрицательный заряд карбоксилатных групп, адсорбированных на частицах, и к тому времени усиливают отталкивание между частицами, предотвращая их агрегирование в более крупные частицы, которые могут оседать и осаждаться на поверхностях труб и областях с низким потоком.
Характеристики стабилизации / диспергирования
Полимер ACUMER 2000 разработан для обеспечения превосходной стабилизации фосфата кальция. Он также демонстрирует отличную стабилизацию карбоната цинка и кальция. Кроме того, ACUMER 2000 является сильным диспергатором, удерживающим ил и часто встречающиеся неорганические частицы во взвешенном состоянии и предотвращающим их осаждение на теплопередающих поверхностях.

Приложения

Стабилизатор / полимер, предотвращающий образование накипи, для обработки охлаждающей воды
Благодаря преимуществам всех дополнительных свойств и высокой эффективности в качестве стабилизатора, антинакипина и диспергатора, ACUMER 2000 особенно рекомендуется для большинства программ обработки охлаждающей воды:
-Фосфатные программы
-Программы на основе цинка
-Расширенные программы All Organic, в которых ACUMER 2000 помогает ингибиторам коррозии, таким как фосфонаты, наносить на металлические поверхности.


Преимущества ACUMER 2000

Обладает превосходной термической и химической стабильностью и может использоваться и храниться в широком диапазоне температур и pH. Эта стабильность позволяет разработчику рецептур производить препараты в одной упаковке при высоком pH для максимального срока хранения.

Обладает исключительной стабильностью в присутствии гипохлорита.

Обеспечивает превосходную устойчивость к железу, когда большинство коммерчески доступных полимеров дезактивировано в присутствии растворимого железа в системе.

Сохраняет поверхности в чистоте, обеспечивая максимальную теплоотдачу и устойчивость к коррозии.


Acumer 2000 - сополимер и стабилизатор, диспергатор и ингибитор отложений для обработки охлаждающей воды.


ACUMER 2000 Диспергатор карбоксилат-сульфонатного сополимера

Свойства:
Карбоксилат-сульфонатный сополимер ACUMER 2000 представляет собой сополимер акрил-акрилат-сульфосат, он является хорошим ингибитором образования отложений для фосфата кальция, карбоната кальция и других неорганических минералов.
Диспергатор на основе карбоксилат-сульфонатного сополимера ACUMER 2000 может эффективно стабилизировать фосфат кальция в формуле, содержащей фосфат.
Он также может стабилизировать цинк в составе, содержащем цинк. ACUMER 2000 может диспергировать неорганические микрочастицы без влияния pH.

Карбоксилат-сульфонатный сополимер ACUMER 2000 является эффективным диспергатором во всех формулах для очистки воды, его можно использовать в качестве диспергатора минералов, стабилизатора фосфата кальция.

Применение:
ACUMER 2000 может использоваться в качестве ингибитора образования накипи в циркулирующей холодной воде и котловой воде, в частности, для фосфатов, ионов цинка и неорганических минералов.
При использовании отдельно предпочтительна дозировка 10-30 мг / л. При использовании в других областях дозировка должна определяться экспериментально.


Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.


Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

  • В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
  • Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
  • Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
  • Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
  • Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с вашим системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.


Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Паспорт безопасности материала
Метакриловая кислота, 99,5% (стабилизированная примерно 250 ppm MEHQ) ACC № 83240
Раздел 1. Идентификация химического продукта и компании

Название паспорта безопасности вещества: Метакриловая кислота, 99,5% (стабилизированная примерно 250 ppm MEHQ)
Каталожные номера: AC168310000, AC168310025, AC168310050, AC168310250, AC168310251, AC168312500, AC168315000, 16831-0010, 16831-0040
Синонимы:
2-метилпропеновая кислота; 2-Метил-2-пропеновая кислота.
Идентификатор компании:

Fisher Scientific
1 Реагент переулок
Fair Lawn, NJ 07410
Для информации звоните:
201-796-7100
Экстренный номер:
201-796-7100
Для получения помощи CHEMTREC звоните:
800-424-9300
Для получения международной помощи CHEMTREC звоните:
703-527-3887

Раздел 2 - Состав, информация о компонентах

CAS № Химическое название процентов EINECS / ELINCS
79-41-4 Метакриловая кислота 99.5 201-204-4
150-76-5 Метиловый эфир гидрохинона 0,025 205-769-8

Раздел 3 - Идентификация опасностей

ОБЗОР АВАРИЙНЫХ СИТУАЦИЙ

Внешний вид: прозрачная бесцветная жидкость. Температура воспламенения: 76 ° C.
Опасно! Вредно при контакте с кожей и если проглотил. Вызывает ожоги всеми путями воздействия. Горючие жидкость и пар.
Органы-мишени: дыхательная система, глаза, кожа.

Возможное воздействие на здоровье


Глаз: Вызывает ожоги глаз. Вызывает покраснение и боль.
Скин: Вредно при попадании через кожу. Вызывает ожоги кожи.
Проглатывание: Может вызвать ожог пищеварительного тракта. Может быть вреден при проглатывании.
Вдыхание: Вызывает химические ожоги дыхательных путей. Вдыхание высокого концентрации могут вызвать отек легких.
Хроническая токсичность: Информации не найдено.
Раздел 4 - Меры первой помощи


Глаза: В случае контакта немедленно промойте глаза большим количеством воды в течение t минимум 15 минут. Немедленно обратитесь за медицинской помощью.
Скин: В случае контакта немедленно промыть кожу большим количеством воды для не менее 15 минут при снятии загрязненной одежды и обуви. Немедленно обратитесь за медицинской помощью.Постирать одежду перед повторным использованием.
Проглатывание: При проглатывании НЕ вызывайте рвоту. Немедленно обратитесь за медицинской помощью. Если пострадавший полностью в сознании, налейте ему стакан воды. Никогда не давай что-нибудь в рот человеку без сознания.
Вдыхание: При вдыхании вывести пострадавшего на свежий воздух. Если не дышит, дайте искусственное дыхание. Если дыхание затруднено, дайте кислород. Получите медицинскую помощь.
На заметку врачу: Лечение симптоматическое и поддерживающее.
Раздел 5 - Меры пожаротушения


Общая информация: Как и при любом пожаре, наденьте автономный дыхательный аппарат в по требованию давления, MSHA / NIOSH (одобренный или эквивалентный) и полный Защитное снаряжение. Используйте водяную струю для хранения контейнеров, подверженных воздействию огня. здорово. Емкости могут взорваться при нагревании. Горючие жидкости и пар.
Средства пожаротушения: Используйте водный спрей, сухой химикат, двуокись углерода или спиртоустойчивые. мыло.
Температура воспламенения: 76 ° C (168,80 ° F)
Температура самовоспламенения: 365 ° C (689,00 ° F)
Пределы взрываемости, нижний: 1,60 об.%
Верхний: 8,80 об.%
Рейтинг NFPA: (приблизительно) Здоровье: 3; Воспламеняемость: 2; Нестабильность: 2
Раздел 6 - Меры при случайном выбросе


Общая информация: Используйте соответствующие средства индивидуальной защиты, как указано в разделе 8.
Разливы / утечки: Абсорбировать пролитое вещество инертным материалом (например, вермикулитом, песком или землей), затем поместите в подходящий контейнер. Удалить все источники возгорания. Обеспечьте вентиляцию.
Раздел 7 - Обращение и хранение


Обращение: После работы тщательно вымыть. Снимите загрязненную одежду и постирать перед повторным использованием. Не допускать попадания в глаза, на кожу или одежду. Пустой контейнеры удерживают остатки продукта (жидкость и / или пар) и могут быть опасный.Хранить контейнер плотно закрытым. Не глотайте и не вдыхайте. Не подвергайте давлению, не режьте, не сваривайте, не паяйте, не паяйте, не сверлите, не шлифуйте и не обнажайте пустые емкости для нагрева, искр или открытого огня. Используйте только с адекватная вентиляция. Беречь от тепла и пламени. Чистый пар будет не ингибируется и может полимеризоваться в вентиляционных отверстиях или других замкнутых пространствах.
Хранение: Хранить вдали от источников возгорания. Хранить в плотно закрытом контейнер. Хранить в прохладном, сухом, хорошо вентилируемом месте вдали от несовместимые вещества.Хранить при температуре около 20 ° C.
Раздел 8 - Контроль воздействия, личная защита


Инженерный контроль: Помещения для хранения или использования этого материала должны быть оборудованы. с устройством для промывания глаз и безопасным душем. Используйте адекватные общие или местная вытяжная вентиляция для удержания концентраций в воздухе ниже допустимые пределы воздействия.
Пределы воздействия
Химическое название ACGIH NIOSH OSHA - Final PELs
Метакриловая кислота 20 частей на миллион TWA 20 частей на миллион TWA; 70 мг / м3 TWA нет в списке
Гидрохинонметиловый эфир 5 мг / м3 TWA 5 мг / м3 TWA нет в списке

OSHA освобожденные PELs: Метакриловая кислота: 20 частей на миллион TWA; 70 мг / м3 TWA Метиловый эфир гидрохинона: 5 мг / м3 TWA
Средства индивидуальной защиты
Глаза: Носите подходящие защитные очки или химические защитные очки в соответствии с описанием OSHA для глаз и лица правила защиты в 29 CFR 1910. 133 или европейский Стандарт EN166.
Скин: Надевайте соответствующие защитные перчатки, чтобы не допустить попадания на кожу экспозиция.
Одежда: Носите соответствующую защитную одежду, чтобы предотвратить появление кожных покровов. экспозиция.
Респираторы: Соблюдайте правила OSHA в отношении респираторов, изложенные в 29 CFR 1910.134 или европейский стандарт EN 149.Использовать Утверждено NIOSH / MSHA или европейским стандартом EN 149 респиратор, если пределы воздействия превышены или если раздражение или другие симптомы.
Раздел 9 - Физические и химические свойства


Физическое состояние: Жидкость
Внешний вид: бесцветный - прозрачный, бесцветный
Запах: отталкивающий
pH: 2-2.2 (100 г / л водн. Раствор)
Давление пара: ,975 мм рт. Ст. При 25 ° C
Плотность пара: 2,97 (воздух = 1)
Скорость испарения: Не доступен.
Вязкость: 1,4 мПа · с при 20 град.
Точка кипения: 163 ° C @ 760 мм рт.
Температура замерзания / плавления: 16 ° C
Температура разложения: Не доступен.
Растворимость: Растворим.
Удельный вес / плотность: 1.0100 г / см3
Молекулярная формула: C4H6O2
Молекулярный вес: 86,09
Раздел 10 - Стабильность и реактивность


Химическая стабильность: Стабильно только при соблюдении рекомендуемых условий хранения и обращения. В стабильность продукта зависит от наличия обоих растворенный кислород и ингибитор MEHQ (CAS = 150-76-5). Наличие кислород необходим для эффективного функционирования MEHQ Продукт никогда не следует хранить в атмосфере инертного газа, всегда храниться в атмосфере, содержащей 5-21% кислорода. объем.
Условия, которых следует избегать: Источники возгорания, избыточное тепло, потеря ингибитора.
Несовместимость с другими материалами: Сильные окислители, соляная кислота
Опасные продукты разложения: Окись углерода, двуокись углерода.
Опасная полимеризация: Может произойти.
Раздел 11 - Токсикологическая информация


RTECS №:
CAS № 79-41-4: OZ2975000
CAS № 150-76-5: SL7700000
LD50 / LC50:
CAS # 79-41-4:
Кожный, морская свинка: LD50 = 1 г / кг;
Оральный, мышь: LD50 = 1250 мг / кг;
Оральный, кролик: LD50 = 1200 мг / кг;
Орально, крыса: LD50 = 1060 мг / кг;
Кожа кролика: LD50 = 500 мг / кг;
.

CAS # 150-76-5:
Тест Дрейза, кролик, кожа: 6 г / 12D (прерывистый) Мягкий;
Проба Дрейза, кролик, кожа: 10%;
Перорально, крыса: LD50 = 1600 мг / кг;
.

Канцерогенность:
CAS # 79-41-4: Не включен в список ACGIH, IARC, NTP или CA Prop 65.
CAS # 150-76-5: Не включен в список ACGIH, IARC, NTP или CA Prop 65.

Эпидемиология: Информация не найдена
Тератогенность: Информация не найдена
Эффекты воспроизводства: Информация не найдена
Мутагенность: Информация не найдена
Нейротоксичность: Информация не найдена
Другие исследования:

Раздел 12 - Экологическая информация

Нет доступной информации.
Раздел 13 - Рекомендации по утилизации

Производители химических отходов должны определить, классифицируется ли выброшенное химическое вещество. как опасные отходы. Рекомендации Агентства по охране окружающей среды США по определению классификации перечислены в 40 CFR, часть 261.3. Кроме того, производители отходов должны ознакомиться с государственными и местными правилами обращения с опасными отходами, чтобы обеспечить полную и точную классификацию.
RCRA P-Series: Нет в списке.
RCRA U-Series: Нет в списке.
Раздел 14 - Информация о транспортировке

ТОЧКА США Канада TDG
Отгрузочное наименование: КИСЛОТА МЕТАКРИЛОВАЯ СТАБИЛИЗИРОВАННАЯ КИСЛОТА МЕТАКРИЛОВАЯ СТАБИЛИЗИРОВАННАЯ
Класс опасности: 8 8
Номер ООН: UN2531 UN2531
Группа упаковки: II II

Раздел 15 - Нормативная информация

ФЕДЕРАЛЬНАЯ ИНФОРМАЦИЯ США
TSCA
CAS № 79-41-4 внесен в список TSCA.Номер
CAS № 150-76-5 внесен в список TSCA.
Список отчетов по охране здоровья и безопасности
Ни один из химикатов не включен в Список отчетов по охране здоровья и безопасности.
Правила химических испытаний
CAS # 150-76-5: 40 CFR 799.5115
Раздел 12b
CAS № 150-76-5: Раздел 4, минимальная концентрация 1%
TSCA Правило значимого нового использования
Ни один из химикатов в этом материале не имеет сертификата SNUR в соответствии с TSCA.
CERCLA Опасные вещества и соответствующие RQ
Ни одно из химических веществ в этом материале не имеет RQ.
SARA Раздел 302 Чрезвычайно опасные вещества
Ни одно из химических веществ в этом продукте не имеет TPQ.
Коды SARA
CAS № 79-41-4: немедленный, пожарный, реактивный.
CAS # 150-76-5: немедленно.
Раздел 313 Никакие химические вещества не подлежат отчетности в соответствии с разделом 313.
Закон о чистом воздухе:
Этот материал не содержит опасных загрязнителей воздуха.
Этот материал не содержит озоноразрушителей класса 1.
Этот материал не содержит озоноразрушителей класса 2.
Закон о чистой воде:
Ни один из химикатов в этом продукте внесены в список опасных веществ согласно CWA.
Ни один из химикатов в этом продукт внесен в список приоритетных загрязнителей согласно CWA.
Ни один из химикатов в этом продукт внесен в список токсичных загрязнителей согласно CWA.
OSHA:
Ни один из химикатов в этом продукте OSHA считает очень опасными.
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ
CAS № 79-41-4 можно найти на следующие списки прав на информацию штата: Калифорния, Нью-Джерси, Пенсильвания, Миннесота, Массачусетс.
CAS # 150-76-5 можно найти на следующие списки прав на информацию штата: Калифорния, Нью-Джерси, Пенсильвания, Миннесота, Массачусетс.

California Prop 65

California Отсутствие значительного уровня риска: Ни один из химических веществ в этом продукте не указан.

Европейские / международные правила
Маркировка в Европе в соответствии с директивами ЕС
Символы опасности:
C
Фразы риска:

R 21/22 Вредно при контакте с кожей и при проглатывании.
R 35 Вызывает сильные ожоги.

Фразы безопасности:

S 26 При попадании в глаза немедленно промыть большим количеством воды
и обратиться к врачу.
S 36/37/39 Носите подходящую защитную одежду, перчатки и защиту глаз / лица pr
.
S 45 В случае аварии или плохого самочувствия немедленно обратиться к врачу.
(по возможности показать этикетку).

WGK (опасность для воды / защита)

CAS # 79-41-4: 1
CAS № 150-76-5: 1
Канада - DSL / NDSL
CAS # 79-41-4 внесен в Список DSL Канады.
CAS # 150-76-5 внесен в список DSL Канады.
Канада - WHMIS
Этот продукт имеет классификацию WHMIS E, D1B, B3.
Этот продукт был классифицирован в соответствии с опасностями. критерии Положения о контролируемых продуктах и ​​Паспорта безопасности материалов содержит всю информацию, требуемую этими правилами.
Канадский список раскрытия ингредиентов
CAS № 79-41-4 включен в Канадский список раскрытия ингредиентов.
CAS № 150-76-5 внесен в Список раскрытия ингредиентов Канады.

Раздел 16 - Дополнительная информация

Дата создания паспорта безопасности: 31.12.1997
Редакция № 6 Дата: 29.07.2008

Приведенная выше информация является точной и представляет информация, доступная нам в настоящее время. Однако мы не даем никаких гарантий товарной пригодности или любой другой гарантии, явной или подразумеваемой, в отношении такая информация, и мы не несем ответственности за ее использование.Пользователи должны провести собственное расследование, чтобы определить пригодность информация для их конкретных целей. Ни при каких обстоятельствах Fisher не несет ответственности за любые претензии, убытки или ущерб любой третьей стороны или за упущенную выгоду или любые специальные, косвенные, случайные, косвенные или образцовые убытки, как бы они ни возникли, даже если Fisher был уведомлен о возможность таких повреждений.

Ламотриджин |

Показание

Ламотриджин показан в качестве дополнительной терапии для следующих типов приступов у пациентов в возрасте ≥ 2 лет: парциальные приступы, первичные генерализованные тонико-клонические приступы и генерализованные судороги, вызванные синдромом Леннокса-Гасто. 14

Он также показан в процессе перехода на лекарственную монотерапию лицам в возрасте от 16 лет и старше с парциальными припадками и в настоящее время получающих лечение карбамазепином, фенитоином, фенобарбиталом, примидоном или вальпроатом в качестве единственного противоэпилептического препарата (AED) . 14

В дополнение к вышесказанному, ламотриджин также показан для поддерживающего лечения биполярного расстройства I типа, отсрочивая время до эпизодов настроения (которые могут включать манию, гипоманию, депрессию, смешанные эпизоды) у взрослых не менее 18 лет и старше, у которых есть лечился от острых симптомов настроения с помощью стандартной терапии. 14

Ограничения использования

Важно отметить, что ламотриджин не следует использовать при лечении эпизодов острого настроения, поскольку эффективность в этом контексте не установлена. 14

Сопутствующие условия
Сопутствующие методы лечения
Противопоказания и предупреждения «черного ящика»

Противопоказания и предупреждения черного ящика

С нашими коммерческими данными можно получить доступ к важной информации об опасных рисках, противопоказаниях и побочных эффектах.

Наши предупреждения «черного ящика» охватывают риски, противопоказания и побочные эффекты.

Фармакодинамика

Ламотриджин, вероятно, предотвращает судороги и предотвращает симптомы настроения за счет стабилизации пресинаптических нейрональных мембран и предотвращения высвобождения возбуждающих нейротрансмиттеров, таких как глутамат. 10,14

Заметка о сердечно-сосудистых эффектах

Сообщается, что метаболит ламотриджина, 2-N-метиловый метаболит (образующийся в результате глюкуронизации), вызывает дозозависимое удлинение интервала PR, расширение комплекса QRS и, при более высоких дозах, полную АВ-блокаду.Хотя этот вредный метаболит обнаруживается только в следовых количествах у людей, концентрации в плазме могут увеличиваться в условиях, вызывающих снижение глюкуронизации лекарственного средства, таких как заболевание печени. 7,14,15

Механизм действия

Точный механизм действия ламотриджина до конца не выяснен, так как он может проявлять клеточную активность, которая способствует его эффективности в различных условиях. Хотя ламотриджин химически не связан, действие ламотриджина напоминает действие фенитоина и карбамазепина, подавляя чувствительные к напряжению натриевые каналы, стабилизируя мембраны нейронов, тем самым модулируя высвобождение пресинаптических возбуждающих нейротрансмиттеров. 7,10,14

Ламотриджин, вероятно, действует, ингибируя натриевые токи, избирательно связываясь с неактивным натриевым каналом, подавляя высвобождение возбуждающей аминокислоты, глутамата. Механизм действия ламотриджина на снижение противосудорожной активности, вероятно, тот же, что и при лечении биполярного расстройства. Исследования ламотриджина выявили его связывание с натриевыми каналами аналогично местным анестетикам, что может объяснить продемонстрированную клиническую пользу ламотриджина при некоторых состояниях невропатической боли. 13

Ламотриджин проявляет связывающие свойства с несколькими различными рецепторами. В лабораторных анализах связывания он демонстрирует слабый ингибирующий эффект на рецептор серотонина 5-HT3. Ламотриджин также слабо связывается с рецепторами аденозина A1 / A2, адренорецепторами α1 / α2 / β, рецепторами дофамина D1 / D2, рецепторами ГАМК A / B, рецепторами гистамина h2, κ-опиоидным рецептором (KOR), рецепторами mACh и серотонином 5-HT2. рецепторы с IC50> 100 мкМ. Слабые ингибирующие эффекты наблюдались на сигма-опиоидных рецепторах. 14 Исследование in vivo выявило доказательства того, что ламотриджин ингибирует токи кальция Cav2.3 (R-тип), что также может способствовать его противосудорожным эффектам. 6

Абсорбция

Ламотриджин быстро и полностью абсорбируется с минимальными эффектами метаболизма при первом прохождении, а его биодоступность оценивается в 98%. Cmax достигается в диапазоне от 1,4 до 4,8 часов после введения дозы, но это зависит от введенной дозы, сопутствующих лекарств и эпилептического статуса.Скорость и степень ламиктальной абсорбции между прессованной таблеткой, взятой с водой, считается эквивалентной таковой у жевательных диспергируемых таблеток, взятых с водой или без нее. 14,15

Объем распределения

Средний кажущийся объем распределения (Vd / F) ламотриджина после перорального приема колеблется от 0,9 до 1,3 л / кг и не зависит от введенной дозы. Ламотриджин накапливается в почках самца крысы и, вероятно, ведет себя аналогичным образом у людей.Ламотриджин также связывается с тканями, содержащими меланин, такими как глаза и пигментированная кожа. 14,15

Связывание с белками

Связывание ламотриджина с белками плазмы оценивается в 55%. 11,14 Ожидается, что этот препарат не будет претерпевать клинически значимых взаимодействий с другими лекарствами через конкуренцию за сайты связывания с белками из-за его более низкого связывания с белками. 14,15

Метаболизм

Ламотриджин в основном глюкуронидирован, образуя конъюгат 2-N-глюкуронида, фармакологически неактивный метаболит. 12 Общая радиоактивность, обнаруженная после приема радиоактивно меченой дозы ламотриджина 240 мг во время клинических испытаний, была следующей: ламотриджин в неизмененном виде (10%), 2-N-глюкуронид (76%), 5-N-глюкуронид (10%). ), 2-N-метиловый метаболит (0,14%), а также различные другие второстепенные метаболиты (4%). 14

Наведите указатель мыши на продукты ниже, чтобы увидеть партнеров по реакции.

Путь выведения

Ламотриджин выводится как с мочой, так и с калом. 12 После перорального приема 240 мг ламотриджина, меченного радиоактивной меткой, около 94% всего введенного лекарственного средства и его метаболитов выводится с мочой, а 2% - с калом. 14 Одно фармакокинетическое исследование выявило от 43 до 87% дозы ламотриджина с мочой, главным образом в виде глюкуронидированных метаболитов. 11 2-N-глюкуронид в основном выводится с мочой. 12

Период полувыведения

Средний период полувыведения ламотриджина составляет примерно 14-59 часов. Значение зависит от введенной дозы, сопутствующей лекарственной терапии, а также от статуса заболевания. 11,15 Одно фармакокинетическое исследование показало период полувыведения 22.От 8 до 37,4 часов у здоровых добровольцев. Также сообщалось, что индуцирующие ферменты противоэпилептические препараты, такие как феобарбитал, фенитоин или карбамазепин, уменьшают период полувыведения ламотриджина. С другой стороны, вальпроевая кислота увеличивает период полувыведения ламотриджина (в пределах 48-59 часов). 11

Клиренс

Средний кажущийся плазменный клиренс (Cl / F) колеблется от 0,18 до 1,21 мл / мин / кг. Значения варьируются в зависимости от режима дозирования, сопутствующих противоэпилептических препаратов и болезненного состояния пациента. 14 В одном исследовании здоровые добровольцы, получавшие ламиктальную монотерапию, показали клиренс около 0,44 мл / мин / кг после однократной дозы. 14

Побочные эффекты

Сократите количество медицинских ошибок

и улучшите результаты лечения с помощью наших всеобъемлющих и структурированных данных о побочных эффектах лекарств.

Сократите количество медицинских ошибок и улучшите результаты лечения с помощью наших данных о побочных эффектах.

Токсичность

Пероральный LD50 у мышей и крыс составляет 205 мг / кг и 245 мг / кг соответственно. Паспорт безопасности материала

Сообщалось о случаях передозировки до 15 г ламотриджина со смертельным исходом. Передозировка ламотриджином проявлялась атаксией, нистагмом, учащением припадков, снижением уровня сознания, комой и задержкой внутрижелудочковой проводимости. Хотя для ламотриджина не существует известного антидота, в случае подозрения на передозировку ламотриджина следует использовать госпитализацию и общие поддерживающие меры. Может потребоваться промывание желудка и рвота с одновременной защитой дыхательных путей.В настоящее время неясно, является ли гемодиализ эффективным средством удаления ламотриджина из системного кровообращения. 15,14

Затронутые организмы
Пути пути
Недоступно
Фармакогеномные эффекты / ADR
Недоступно

% PDF-1.3 % 129 0 объект > эндобдж xref 129 110 0000000016 00000 н. 0000002552 00000 н. 0000003359 00000 п. 0000003595 00000 н. 0000003679 00000 н. 0000003775 00000 н. 0000003915 00000 н. 0000004031 00000 н. 0000004091 00000 н. 0000004205 00000 н. 0000004265 00000 н. 0000004394 00000 н. 0000004454 00000 п. 0000004585 00000 н. 0000004645 00000 н. 0000004769 00000 н. 0000004829 00000 н. 0000004951 00000 н. 0000005011 00000 н. 0000005115 00000 н. 0000005175 00000 н. 0000005298 00000 п. 0000005358 00000 п. 0000005512 00000 н. 0000005572 00000 н. 0000005721 00000 н. 0000005781 00000 н. 0000005930 00000 н. 0000006045 00000 н. 0000006105 00000 н. 0000006165 00000 н. 0000006272 00000 н. 0000006405 00000 н. 0000006465 00000 н. 0000006658 00000 п. 0000006718 00000 н. 0000006778 00000 н. 0000006931 00000 н. 0000006991 00000 н. 0000007182 00000 н. 0000007242 00000 н. 0000007328 00000 н. 0000007388 00000 н. 0000007550 00000 н. 0000007610 00000 н. 0000007704 00000 н. 0000007821 00000 н. 0000007881 00000 н. 0000008038 00000 н. 0000008139 00000 н. 0000008238 00000 п. 0000008298 00000 н. 0000008469 00000 н. 0000008561 00000 п. 0000008659 00000 н. 0000008719 00000 п. 0000008851 00000 н. 0000008911 00000 н. 0000009025 00000 н. 0000009085 00000 н. 0000009240 00000 п. 0000009323 00000 н. 0000009412 00000 н. 0000009472 00000 н. 0000009594 00000 н. 0000009654 00000 п. 0000009714 00000 н. 0000009774 00000 н. 0000009834 00000 н. 0000009965 00000 н. 0000010095 00000 п. 0000010155 00000 п. 0000010215 00000 п. 0000010330 00000 п. 0000010390 00000 п. 0000010450 00000 п. 0000010510 00000 п. 0000010570 00000 п. 0000010630 00000 п. 0000010805 00000 п. 0000010865 00000 п. 0000011048 00000 п. 0000011108 00000 п. 0000011207 00000 п. 0000011307 00000 п. 0000011367 00000 п. 0000011427 00000 п. 0000011564 00000 п. 0000011624 00000 п. 0000011736 00000 п. 0000011796 00000 п. 0000011931 00000 п. 0000011991 00000 п. 0000012102 00000 п. 0000012162 00000 п. 0000012284 00000 п. 0000012344 00000 п. 0000012446 00000 п. 0000012506 00000 п. 0000012566 00000 п. 0000012625 00000 п. 0000014114 00000 п. 0000014137 00000 п. 0000014416 00000 п. 0000015519 00000 п. 0000015808 00000 п. 0000016922 00000 п. 0000017194 00000 п. 0000002652 00000 н. 0000003337 00000 н. трейлер ] >> startxref 0 %% EOF 130 0 объект > эндобдж 237 0 объект > поток Hb``f`a`g``ǀ

Повышенная иммуногенность стабилизированного тримерного растворимого гемагглютинина гриппа

Абстрактные

Фон

Недавняя пандемия h2N1 свиного происхождения иллюстрирует необходимость разработки улучшенных процедур для быстрого производства противогриппозных вакцин.Одной альтернативой нынешнему производству вакцины против гриппа на основе яиц является производство субъединичной вакцины гемагглютинина (НА) с использованием рекомбинантной системы экспрессии с потенциалом высоких выходов белка, легкостью клонирования новых антигенных вариантов и установленным рекордом безопасности для людей.

Методология / основные результаты

Мы создали растворимый НА (sHA), полученный из вируса h4N2 A / Aichi / 2/68, модифицированный на С-конце повторением тримеризации GCN4pII для стабилизации нативной тримерной структуры НА.При экспрессии в бакуловирусной системе модифицированная sHA образовывала нативные тримеры. Напротив, было обнаружено, что немодифицированный sHA представляет эпитопы, распознаваемые специфическим моноклональным антителом с низкой конформацией pH. Мы обнаружили, что мыши, примированные и усиленные 3 мкг тримерного sHA в отсутствие адъювантов, имели значительно более высокие титры IgG и HAI, чем мыши, которые получали немодифицированный sHA. Это коррелировало с увеличением выживаемости и снижением потери веса после летального заражения адаптированным к мышам вирусом A / Aichi / 2/68.Кроме того, мыши, получившие однократную вакцинацию тримерным sHA в отсутствие адъювантов, улучшили выживаемость и потерю массы тела по сравнению с мышами, вакцинированными немодифицированным sHA.

Выводы / Значение

Наши данные показывают, что рекомбинантный тримерный sHA представляет нативные тримерные эпитопы, тогда как немодифицированный sHA представляет эпитопы, не экспонированные в нативной молекуле HA. Эпитопы, представленные в немодифицированном sHA, составляют «молчащее лицо», которое может исказить ответ антител на эпитопы, недоступные в живом вирусе при нейтральном pH.Результаты демонстрируют, что тримерный sHA является более эффективным кандидатом на вакцину против гриппа, и подчеркивают важность дизайна антигена на основе структуры в улучшении рекомбинантных вакцин НА.

Образец цитирования: Велдон В.С., Ван Б.З., Мартин М.П., ​​Кутсонанос Д.Г., Скунцу И., Compans RW (2010) Повышенная иммуногенность стабилизированного тримерного растворимого гемагглютинина гриппа. PLoS ONE 5 (9): e12466. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0012466

Редактор: Ральф Трипп, Университет Джорджии, Соединенные Штаты Америки

Поступило: 7 июня 2010 г .; Принята в печать: 30 июля 2010 г .; Опубликовано: 1 сентября 2010 г.

Авторские права: © 2010 Weldon et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Финансирование: это исследование было поддержано грантами AI074579 и EB006369 Национальных институтов здравоохранения. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Вирус гриппа - одна из наиболее частых причин серьезных респираторных заболеваний. С начала сезона гриппа 2009–2010 гг. CDC сообщил, что все выделенные в результате госпитализации вирусы гриппа A субтипа были новым вирусом h2N1 2009 года [1]. Моновалентные вакцины против h2N1 были распространены в Соединенных Штатах; однако из-за более низкого, чем ожидалось, уровня производства возникла нехватка вакцины. Производство вакцины против гриппа в яйцах требует генерации высокопродуктивных реассортантных вирусов роста яиц и большого количества куриных яиц с эмбрионами, а вакцина потенциально опасна для людей с аллергией на яйца [2], [3], [4], [ 5].По этим причинам были предприняты усилия по разработке альтернативных методов производства вакцин. Производство белков гриппа в рекомбинантных системах экспрессии является одним из таких подходов; Рекомбинантная вакцина НА была произведена в системах экспрессии бактерий, растений, млекопитающих и рекомбинантного бакуловируса (rBV). Система экспрессии rBV имеет несколько преимуществ по сравнению с традиционными методами производства вакцин на основе яиц, включая высокие уровни экспрессии рекомбинантного белка [6], быстрое масштабирование продукции для удовлетворения высоких требований [2], установленный рекорд безопасности [2], [5] ], [7] и более быстрое производство новых вакцин в ответ на антигенный сдвиг или дрейф [2], [8].Одним из недостатков рекомбинантных вакцин НА является отсутствие других вирусных белков, таких как нейраминидаза или М2.

Белки, продуцируемые в системе rBV, используют те же сайты гликозилирования, что и белки млекопитающих. Однако в системе клеток насекомых основной углеводной составляющей является углевод с высоким содержанием маннозы, в то время как системы млекопитающих имеют удлиненные углеводы с обычным промежуточным продуктом с высоким содержанием маннозы [6]. Предыдущие исследования показали, что рекомбинантный HA, продуцируемый в системах экспрессии насекомых и млекопитающих, не имеет значительного изменения связывания рецептора [9].Несмотря на различие в гликозилировании, иммуногенность НА, полученного от насекомых, сравнима с HA, экспрессируемой млекопитающими [10].

Вакцина против сезонного гриппа является трехвалентной и содержит два штамма гриппа типа A (h2N1 и h4N2) и один штамм гриппа типа B. Основным компонентом противогриппозной вакцины является вирусный гемагглютинин (НА), тримерный трансмембранный белок I типа, состоящий из двух цепей, НА1 и НА2, связанных межцепочечными дисульфидными связями [11]. Во время жизненного цикла вируса гриппа НА функционирует, связывая концевые остатки сиаловой кислоты на гликопротеинах клетки-хозяина, инициируя рецепторно-опосредованный эндоцитоз и позволяя вирусу проникать в клетку в эндосоме.После интернализации HA опосредует слияние мембран вируса и хозяина за счет изменения структурной конформации, вызванного низким pH [11], [12], [13].

В настоящее время существует 16 различных антигенных подтипов НА вирусов гриппа А [14]. Есть два основных механизма, позволяющих вирусам гриппа А уклоняться от иммунного ответа и более быстро распространяться среди населения, антигенный дрейф и антигенный сдвиг. Антигенный дрейф является результатом точечных мутаций в генах HA и NA, которые находятся под селективным давлением реакции антител хозяина.Антигенный сдвиг - это термин, используемый для описания появления новых вирусов в результате генетического реассортманта вирусных сегментов РНК. [11], [15]

Поскольку HA является наиболее иммунологически важным компонентом противогриппозных вакцин, мы создали систему для производства белковой субъединичной вакцины с использованием растворимого HA гриппа на основе rBV, модифицированного тримеризирующим гептадным повтором, полученным из фактора транскрипции GCN4 [16], [17] ], [18], чтобы стабилизировать нативную тримерную структуру белка НА.Мы определили влияние этой стабилизации на иммуногенность белковой вакцины и ее способность вызывать защитный иммунный ответ на заражение гомологичным вирусом у мышей, примированных и усиленных низкой дозой вакцины без адъювантов.

Результаты

Полученный из рекомбинантного бакуловируса растворимый НА Aichi / 2/68 выражается как предшественник НА0

Диаграммы рекомбинантных конструкций экспрессии бакуловируса для растворимого НА, полученного из вируса h4N2 A / Aichi / 2/68 с модификацией GCN4pII, показаны на рисунке 1.Клетки насекомых Sf9 экспрессировали и секретировали ~ 8 мкг очищенного рекомбинантного белка на мл культуры клеток Sf9. Белки sHA и sHA.GCN4pII мигрировали на SDS-PAGE в виде отдельных полипептидов с приблизительно 70 и 75 кДа соответственно, что указывает на то, что рекомбинантные белки экспрессировались как предшественники HA (HA0). Большая молекулярная масса белка sHA.GCN4pII указывает на то, что модификация GCN4pII была добавлена ​​к С-концу белка HA h4N2. Вестерн-блот-анализ рекомбинантных белков НА с использованием контрольных сывороток от инфицированных мышей A / Aichi / 2/68 показывает, что рекомбинантные белки антигенно сходны с вирусным НА (рис. 2А), а связывание моноклональных антител против His демонстрирует, что His- тег был включен в белок (рис. 2В) (дорожка 1 = sHA, дорожка 2 = sHA.GCN4pII). Окрашивание кумасси синим после разделения sHA и sHA и sHA.GCN4pII с помощью SDS-PAGE показало единственную полосу, соответствующую рекомбинантным белкам, что указывает на относительно высокий уровень чистоты (рис. 2С). Кроме того, оба рекомбинантных белка продуцируются как предшественник НА0 с высоким выходом в системе экспрессии бакуловируса.

Рисунок 1. Рекомбинантные растворимые конструкции НА.

A. Полноразмерный предшественник гемагглютинина h4N2 A / Aichi / 2/68 (HA0).TM = трансмембранный домен, CT = цитозольный домен. Сайт расщепления у R328 указан стрелкой. B. Растворимые конструкции HA h4N2 A / Aichi / 2/68. Растворимый HA h4N2 был получен путем удаления трансмембранного (TM) и цитозольного (CT) домена. Модифицированный тримерный растворимый НА h4N2 был получен путем слияния повтора тримеризации GCN4pII с С-концом НА с коротким пептидным линкером (G6S9).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0012466.g001

Рис. 2. Рекомбинантный h4N2 A / Aichi / 2/68 выражается как предшественник гемагглютинина (HA0).

А, Б. Вестерн-блоттинг разделенных с помощью SDS-PAGE sHA (дорожка 1) и sHA.GCN4pII (дорожка 2) с использованием поликлональных сывороток или моноклональных антител против гистидиновой метки (первичное антитело). Полосы белка были получены с использованием козьих антимышиных HRP (вторичных антител) и ECL Plus (GE Healthcare). C. Окрашивание кумасси синим sHA (дорожка 1) и sHA.GCN4pII (дорожка 3) после очистки на колонке с никелевыми шариками. Дорожка 2 - маркер молекулярной массы. На каждую дорожку загружали 1 мкг рекомбинантного белка.

https: // doi.org / 10.1371 / journal.pone.0012466.g002

Для определения олигомерной структуры рекомбинантных белков сшивание было выполнено с использованием BS3, водорастворимого сшивающего агента длиной примерно 11 ангстрем, который реагирует с первичными аминами, таким образом, ковалентно связывая белки. все вместе. В мультимерных белках, подвергнутых действию этого сшивающего агента, каждая субъединица будет сшита вместе, что позволит анализировать их на денатурирующих гелях для вестерн-блоттинга [19], [20]. Используя этот подход, мы определили олигомерную структуру рекомбинантного растворимого НА с модификацией GCN4pII и без нее.Разделение продуктов реакции с помощью градиентного SDS-PAGE и вестерн-блот-анализа показывает, что sHA наблюдается как смесь тримерных (~ 210 кДа), димерных (~ 140 кДа) и мономерных белков (~ 70 кДа) (рис. 3А - дорожка). 1,2). Однако модификация белка sHA на С-конце повторением тримеризации GCN4pII стабилизировала тримерную структуру секретируемого рекомбинантного белка (~ 220 кДа) (рис. 3А - дорожка 3,4).

Рис. 3. Модификация GCN4pII стабилизирует тримерную структуру растворимого НА A / Aichi / 2/68.

A. BS 3 Сшивание выполняли, как описано в разделе «Материалы и методы». Дорожки 1 и 2 - sHA, дорожки 3 и 4 - sHA.GCN4pII. Дорожки 1 и 3, без BS3, дорожки 2 и 4, 3 мМ BS3. Тримерный HA соответствует полосе ~ 220 кДа, димерный HA соответствует полосе ~ 140 кДа, а мономерный HA соответствует полосе ~ 75 кДа первичного антитела вестерн-блоттинга, моноклонального антитела против гистидина. Б. Сэндвич-ELISA. 20 мкг sHA (красный кружок) или sHA.GCN4pII (синий квадрат) были захвачены с использованием анти-A / Aichi / 2/68 морских свинок, затем сродство связывания HC67, LC89 или поликлональных сывороток определяли по поглощению при 450 нм.C. Тест гемагглютинации с использованием 1 мкг рекомбинантного белка (sHA или sHA.GCN4pII) или PBS. Белки разводили в PBS и инкубировали при комнатной температуре в течение 30 минут с 0,05% куриных эритроцитов (промытых).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0012466.g003

В дополнение к анализу путем химического сшивания рекомбинантных белков связывание моноклональных антител использовали для определения конформации рекомбинантного растворимого НА. Связывание антител с помощью сэндвич-ELISA указывает на то, что тримерное HA A / Aichi / 2/68 HA-специфическое моноклональное антитело HC67 связывается с sHA.GCN4pII с более высоким сродством по сравнению с sHA, что указывает на то, что тримерный HA был преобладающей формой в модифицированном растворимом HA (рис. 3B). Это подтверждает наши выводы с использованием перекрестного связывания рекомбинантных белков. Моноклональное антитело LC89, специфичное к НА с низким pH A / Aichi / 2/68, связывалось с немодифицированным sHA с более высоким сродством, чем тримерное sHA, что указывает на то, что немодифицированный, но не модифицированный тримерный sHA проявляет эпитопы, которые экспонируются в конформации с низким pH .

Обработанная бромелайном ГК с низким pH (ВНА) образует розетки в растворе за счет гидрофобных взаимодействий между гибридным пептидом соседней ВНА, позволяя белку агглютинировать эритроциты [20], [21].Мы сравнили рекомбинантные sHA и sHA.GCN4pII в анализе гемагглютинации и обнаружили, что белок sHA.GCN4pII способен агглютинировать куриные эритроциты, а sHA - нет (рис. 3C). Это демонстрирует, что модифицированный белок укладывается в нативную структуру НА и сохраняет способность связывать рецепторы сиаловой кислоты на эритроцитах, вызывая агглютинацию. Следовательно, модификация HA h4N2 Aichi на С-конце повтором GCN4pII не препятствует рецепторной связывающей активности тримерного белка.

sHA.GCN4pII вызывает устойчивый гуморальный иммунный ответ

Для сравнения иммуногенности тримерного sHA.GCN4pII и немодифицированного sHA самок мышей Balb / c (6-8 недель) вакцинировали подкожно (п / к) 3 мкг sHA или sHA.GCN4pII в день 0 и бустировали на 21 день. Мыши, примированные sHA.GCN4pII, имели сывороточные ответы IgG на гомологичный инактивированный вирус A / Aichi / 2/68, тогда как мыши, примированные sHA, не имели обнаруживаемых антигенспецифических IgG с помощью ELISA (фиг. 4A). После повышения уровень sHA.Группа, вакцинированная GCN4pII, имела примерно в 15 раз более высокие титры сывороточного IgG, чем мыши, вакцинированные sHA (фиг. 4A).

Рис. 4. sHA.GCN4pII вызывает более устойчивые гуморальные ответы по сравнению с sHA.

A. Мышей примировали и стимулировали через 3 недели 3 мкг sHA (красный), sHA.GCN4pII (синий) или PBS (наивный - зеленый). Кровь собирали на 21 день после прайминга (прайм) и на 21 день после бустинга (бустинг). Планшеты для ELISA покрывали 4 мкг / мл вируса A / Aichi / 2/68 и измеряли антиген-специфический сывороточный IgG ELISA для прайма и бустера.Для обнаружения использовали конъюгированные с HRP козьи антимышиные IgG. B. Подтип IgG ELISA. Сыворотку, собранную через 21 день после бустинга, тестировали антиген-специфическим подклассом IgG с помощью ELISA, как описано в разделе «Материалы и методы». Планшеты для ELISA покрывали 4 мкг / мл A / Aichi / 2/68, и подклассы антигенспецифических IgG определяли с использованием конъюгированных с HRP козьих антимышиных IgG1 или IgG2a. C. Тест ингибирования гемагглютинации первичной и бустерной сыворотки выполняли, как описано в разделе «Материалы и методы», с использованием живых MDCK, выращенных A / Aichi / 2/68.(n = 6 в группе)

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0012466.g004

Тест HAI используется для измерения антител, которые связываются с доменом связывания рецептора HA, блокируя связывание с рецепторами сиаловой кислоты. В целом, титр HAI ≥40 коррелирует с защитой, индуцированной вакциной, у людей [22]. Поэтому сыворотку, собранную у мышей, примированных и усиленных рекомбинантными белками, тестировали на титры HAI. Через 21 день после примирования сыворотки мышей, вакцинированных sHA.GCN4pII, имели средний геометрический титр HAI, равный 16, в то время как сыворотки из группы, вакцинированной sHA, не имели обнаруживаемой активности HAI.После иммунизации сыворотки мышей, вакцинированных sHA.GCN4pII, имели среднее геометрическое значение титра HAI приблизительно 700, в то время как в группе sHA не было обнаруживаемого титра HAI (фигура 4C). Таким образом, модифицированная тримерная вакцина h4N2 sHA обладает значительно большей способностью индуцировать функциональные антитела против гриппа по сравнению с немодифицированным антигеном h4N2 sHA.

Мыши, вакцинированные sHA.GCN4pII, экспрессируют аналогичные уровни сывороточных IgG1 и IgG2a

Различия в биологических функциях подклассов IgG хорошо известны [23], а цитокины Т-хелперов, ответственные за переключение классов, были тщательно изучены [24].Поэтому мы сравнили антигенспецифические уровни IgG1 и IgG2a у мышей, вакцинированных sHA или sHA.GCN4pII с помощью ELISA. На 21 день после повторной иммунизации мыши, вакцинированные sHA.GCN4pII, имели более высокие уровни антигенспецифического IgG1 в сыворотке, чем мыши, вакцинированные sHA. Кроме того, мыши, вакцинированные sHA.GCN4pII, имели антигенспецифический сывороточный IgG2a, в то время как мыши, вакцинированные sHA, не имели обнаруживаемого антигенспецифического IgG2a (фигура 4B). Для мышей, вакцинированных sHA.GCN4pII, наблюдались аналогичные относительные количества IgG1 и IgG2a, что свидетельствует о сбалансированной среде цитокинов Th2 / Th3.

sHA.GCN4pII индуцирует защитный иммунный ответ на летальную стимуляцию вирусом A / Aichi / 2/68, адаптированным к мышам

Для сравнения эффективности тримерного sHA и мономерного sHA в качестве вакцинных антигенов мышей, вакцинированных 3 мкг sHA или sHA.GCN4pII, заражали 5 x LD50 гомологичного адаптированного вируса A / Aichi / 2/68 мыши путем интраназальной инстилляции. Вес тела и выживаемость контролировали в течение 14 дней после заражения. После заражения в группе sHA средняя потеря массы тела составляла приблизительно 20% со скоростью, сравнимой с мышами, получавшими PBS (наивными) (фиг. 5A).Однако группа, вакцинированная sHA.GCN4pII, сохраняла исходную массу тела в течение всего эксперимента. Примечательно, что мыши, получившие вакцину sHA.GCN4pII, имели коэффициент выживаемости 100% (5/5) по сравнению с мышами, вакцинированными sHA, которые имели коэффициент выживаемости 33% (2/6) (Рисунок 5B) (p = 0,0269). . Эта разница в потере веса и выживаемости демонстрирует повышенную эффективность модифицированной тримерной HA вакцины Aichi GCN4pII по сравнению с немодифицированной HA вакциной h4N2.

Рисунок 5. SHA.GCN4pII обеспечивает полную защиту после двух вакцинаций, в отличие от sHA.

Праймированных и бустированных мышей заражали 5 xLD 50 адаптированного к мыши h4N2 A / Aichi / 2/68. А, В. За массой тела и выживаемостью наблюдали в течение 14 дней после заражения. sHA (круг), sHA.GCN4 (квадрат), PBS (перевернутый треугольник). Открытые символы с пунктирной линией указывают% средней начальной массы тела выживших мышей для каждой группы. Закрашенные символы со сплошной линией обозначают% средней начальной массы тела мышей с признаками заболеваемости.(n = 6 в группе)

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0012466.g005

Однократная иммунизация sHA.GCN4pII увеличивает выживаемость и снижает признаки заболеваемости

Для определения эффективности однократной вакцинации самок мышей Balb / c (6–8 недель) вакцинировали подкожно. с 3 мкг sHA или sHA.GCN4pII. Сыворотку собирали на 14 и 28 день после вакцинации, и титры сывороточных IgG и HAI измеряли, как указано выше. На 14 день sHA.GCN4pII индуцировал вирус-специфический сывороточный IgG-ответ приблизительно 52 нг / мл, в то время как sHA индуцировал не обнаруживаемый вирус-специфический IgG.На 28 день после вакцинации sHA.GCN4pII индуцировал в 144 раза более высокий вирус-специфический сывороточный IgG-ответ по сравнению с животными, вакцинированными sHA (фиг. 6A). У двух из шести животных из группы sHA.GCN4pII был положительный титр HAI, в то время как мыши, вакцинированные sHA, не имели определяемого титра HAI (данные не показаны).

Рисунок 6. sHA.GCN4pII вызывает более сильный защитный иммунный ответ после однократной вакцинации по сравнению с sHA.

A. ИФА сывороточных IgG. Планшеты покрывали 4 мкг / мл A / Aichi / 2/68, и антиген-специфический IgG был обнаружен в сыворотке, собранной на 14-й и 28-й день после вакцинации, с использованием конъюгированного с HRP козьего антимышиного IgG.Мышей, вакцинированных рекомбинантными белками HA Aichi, заражали на 31 день после вакцинации 5-кратной LD50 адаптированной мыши A / Aichi / 2/68. B, C. За массой тела и выживаемостью наблюдали в течение 14 дней после заражения. sHA (круг), sHA.GCN4 (квадрат), PBS (перевернутый треугольник). Открытые символы с пунктирными линиями указывают% средней начальной массы тела выживших мышей для каждой группы. Закрашенные символы со сплошными линиями обозначают% средней начальной массы тела мышей с признаками заболеваемости. (n = 6 в группе)

https: // doi.org / 10.1371 / journal.pone.0012466.g006

Мышей заражали 5 x LD 50 мышиных адаптированных A / Aichi / 2/68 путем интраназальной инстилляции. Мыши, вакцинированные sHA.GCN4pII, имели ограниченную потерю массы тела по сравнению с мышами, вакцинированными sHA или контрольными мышами (фигура 6B). Несмотря на умеренные титры IgG и HAI, 5/6 мышей, вакцинированных sHA.GCN4pII, выжили при заражении по сравнению с мышами, вакцинированными sHA, у которых выжило только 1/6 (фигура 6C). Эти результаты демонстрируют, что стабилизация тримерной структуры растворимого НА h4N2 усиливает защитные иммунные ответы после однократной вакцинации в отсутствие адъювантов (p = 0.0195).

Обсуждение

Вирус гриппа остается важным респираторным патогеном с потенциалом вызывать всемирные пандемии, такие как «испанский» вирус гриппа в 1918 году и новую пандемию h2N1 свиного происхождения в 2009 году [25]. Кроме того, недавние задержки с производством моновалентной вакцины против h2N1 демонстрируют потребность в быстро производимой и безопасной альтернативе гриппозным вакцинам на основе яиц. Здесь мы исследовали использование экспрессии рекомбинантного бакуловируса для получения растворимых форм белка НА, который является основной мишенью нейтрализующих антител.Эта система имеет несколько преимуществ, включая высокий уровень экспрессии белка [6] и установленный рекорд безопасности для людей [2], [5], [7]. Современное производство противогриппозной вакцины требует получения высокоурожайного реассортанта роста яиц для получения достаточного урожая для производства вакцины. Используя молекулярное клонирование, ген НА из циркулирующих вирусов может быть клонирован непосредственно из клинических изолятов, и рекомбинантная белковая вакцина может быть быстро произведена для предотвращения новых сезонных вспышек или пандемий в результате антигенного дрейфа или сдвига [2], [8].

В этом исследовании мы создали растворимый гемагглютинин (sHA), производный rBV, модифицированный на его С-конце гептадным повтором тримеризации GCN4pII для стабилизации тримерной структуры секретируемого белка. Гептадный повтор происходит от дрожжевого транскрипционного фактора GCN4, который играет роль в биосинтезе аминокислот во время голодания. Гептадный повтор дикого типа образует стабильные димеры; однако, изменяя положения «a» и «d» в гептадном повторе, могут образовываться тримерные или тетрамерные спиральные спирали [16], [17].Эта стратегия была недавно использована для изучения структуры и функции гликопротеина оболочки ВИЧ-1 и белка 5F вируса парагриппа [26], [27].

sHA, выбранный для этого исследования, был получен из вируса h4N2 A / Aichi / 2/68 из-за обширных данных о его структуре и функции, ранее опубликованных [12], [28], [29], [30]. Наши данные показали, что модификация GCN4pII стабилизировала тримерный sHA в растворе, что было определено сшивкой BS3 и анализом вестерн-блоттингом.Мыши, примированные и усиленные низкой дозой рекомбинантного sHA.GCN4pII без адъюванта, имели улучшенный гуморальный ответ на HA h4N2 по сравнению с мышами, получавшими немодифицированный белок sHA. Наши результаты также согласуются с результатами, полученными с использованием растворимого НА вируса h4N2 A / Victoria / 3/75, в котором мономерный НА индуцировал НА-специфические антитела; однако не было обнаружено связывания с тримерным вирусным НА [31]. Кроме того, мыши, вакцинированные sHA A / Victoria / 3/75, не были защищены от заражения гомологичным адаптированным вирусом для мышей.

В других исследованиях с использованием рекомбинантного гриппа sHA использовалась HA из h2 [4], [5], [8], h4 [3], [5], [8], [32], [33], H5 [10], [21], [34] и подтипы H7 [21] в дополнение к гемагглютинину гриппа B [5], [8] в качестве вакцинного антигена. Свойства этих sHA были проанализированы с помощью анализа гемагглютинации, чувствительности к трипсину и / или электронной микроскопии [4], [7], [21]. В целом способность этих рекомбинантных белков образовывать стабильные тримеры варьируется в зависимости от подтипов и вирусов. В текущем исследовании мы использовали водорастворимый сшивающий агент, BS3, который связывает мономеры внутри олигомерной структуры, чтобы охарактеризовать тримерную структуру рекомбинантного h4 sHA [19], [20].Сшивание обеспечивает преимущество возможности определять приблизительное соотношение олигомеров в растворе без необходимости использования сложных методов эксклюзионной хроматографии. Модификация НА H5 доменом тримеризации фолдона из белка фибритина Т4 также приводила к образованию растворимого тримерного НА в системе рекомбинантного бакуловируса, который был более иммуногенным, чем немодифицированный белок, когда мышей вакцинировали рекомбинантным белком с адъювантом [10]. Кроме того, повторение тримеризации GCN4 использовалось для изучения иммуногенности НА H5 у домашней птицы [35].Наши данные ясно демонстрируют, что повышенная иммуногенность тримерного НА h4 обусловлена ​​представлением нативных тримерных эпитопов в стабилизированном белке GCN4pII, в то время как немодифицированный белок представляет эпитопы, связанные с измененной конформацией белка НА с низким pH.

Наши данные показывают, что sHA.GCN4pII генерирует более высокие уровни как IgG2a, так и IgG1, чем растворимый HA Aichi. Соотношение IgG1: IgG2a, которое мы наблюдаем после бустинга, предполагает, что цитокиновая среда является сбалансированным фенотипом Th2 / Th3 в sHA.Группа GCN4pII, в то время как мыши, иммунизированные sHA, проявляют фенотип Th3. В модели гриппа на мышах предполагается, что вирусспецифические хелперные Т-клетки 1-го класса (Th2) играют более важную роль в клиренсе вируса в легких по сравнению с хелперными Т-клетками 2-го класса (Th3), которые связаны с усилением воспаления дыхательных путей и повышенной заболеваемостью [ 36]. Более того, более высокие сывороточные уровни IgG2a, которые регулируются Th2-ассоциированными цитокинами [37], у мышей, вакцинированных sHA.GCN4pII, могут указывать на то, что обнаружение более эффективного клиренса вируса может быть связано с эффекторными функциями IgG2a, такими как комплемент активация и связывание с рецептором Fc [23], [38], [39].Следовательно, при оценке эффективности вакцины против гриппа следует учитывать как количество, так и качество гуморального иммунного ответа в дополнение к фенотипу хелперных Т-клеток.

Примечательно, что наблюдаемая защита не требовала использования каких-либо адъювантов при вакцинации, хотя мы не можем исключить какие-либо недокументированные адъювантные свойства повтора GCN4pII. Используя модифицированный рекомбинантный НА, мы смогли вызвать полную защиту у мышей после летального заражения адаптированным мышам A / Aichi / 2/68 после двух вакцинаций.Кроме того, мы смогли обеспечить защиту 5/6 мышей после однократной вакцинации 3 мкг sHA.GCN4pII в отсутствие адъювантов. Таким образом, тримерный антиген обладает высоким потенциалом индукции защитных иммунных ответов при однократной вакцинации, который может быть дополнительно усилен включением одобренных адъювантов.

Эти результаты демонстрируют, что при использовании конструкции экспрессии, использованной в данном исследовании, нестабильность НА устраняется стабилизацией тримерной структуры посредством гептадного повтора тримеризации GCN4pII.Кроме того, было продемонстрировано, что стабилизированный тримерный НА проявляет повышенную иммуногенность по сравнению с немодифицированным НА при однократной вакцинации в отсутствие адъювантов. Эти различия можно объяснить наличием конформации с низким pH в немодифицированном sHA, обнаруживаемым связыванием моноклональных антител. Предыдущие исследования структуры мономера X31 HA (A / Aichi2 / 68) показали, что тримерный белок диссоциирует на мономерные субъединицы [40]. Антитела, которые распознают эту структуру с низким pH, могут взаимодействовать с эпитопами на границе раздела мономер-мономер или «молчащей стороне» молекулы гемагглютинина.Представляя «молчаливое лицо» в немодифицированном sHA, репертуар антител может быть искажен в сторону эпитопов, недоступных в живом вирусе при нейтральном pH. Следовательно, за счет сохранения нативной тримерной структуры НА, sHA.GCN4pII представляет собой лучшего кандидата на вакцину от субъединицы гриппа.

Материалы и методы

Заявление об этике

Мышей содержали в стерильном помещении и лечили в соответствии с рекомендациями Медицинской школы Университета Эмори (Атланта, Джорджия), и все исследования на животных были одобрены Комитетом по институциональному уходу и использованию животных Университета Эмори.

Получение растворимого гемагглютинина гриппа

Ген НА из A / Aichi / 2/68 был получен от Дэвида Стейнхауэра. Ген растворимого НА (sHA) получали путем введения стоп-кодона перед трансмембранным доменом с помощью ПЦР (K528). Ген sHA клонировали (Quickligase, New England Biolabs - Ipswich, MA) в вектор pET22b (+) (Novagen / Merck KGaA, Дармштадт, Германия) с использованием BamHI и SalI для введения 6X His-метки на С-конце, а затем субклонировали в рекомбинантный бакуловирусный вектор pFastBac1 (Invitrogen - Carlsbad, CA - Carlsbad, CA) с использованием BamHI и XbaI.Сегмент ДНК, кодирующий тримерный гептадный повтор GCN4pII (RMKQIEDKIEEILSKIYHIENEIARIKKLVGER), полученный из димерного повтора GCN4 дикого типа, обнаруженного в Saccharomyces cerevisiae, был сконструирован с использованием двух раундов ПЦР, затем клонирован в pET22b (+) [16], [17]. Затем последовательность GCN4pII субклонировали в pFastBac1, содержащую ген sHA, с использованием EagI и SalI, как описано выше (sHA.GCN4pII). Все плазмиды секвенировали для подтверждения выведенных аминокислотных последовательностей (Agencourt / Beckman Coulter Genomics - Danver, MA).

Продукция рекомбинантных бакуловирусов sHA и sHA.GCN4pII

векторов pFastBac1, содержащих гены sHA и sHA.GCN4pII, трансформировали в клетки Dh20Bac и получали рекомбинантные бакуловирусы в соответствии с протоколом производителя (Invitrogen - Carlsbad, CA). Клетки Sf9 трансфицировали бакмидами, как описано ранее [41].

Экспрессия рекомбинантного белка sHA и аффинная очистка His-tag

Анализ

бляшек выполняли в соответствии с протоколом Bac-to-Bac Kit (Invitrogen - Carlsbad, CA).Клетки Sf9 инфицировали при MOI 1 и инкубировали в течение 48 часов для экспрессии рекомбинантного белка. Супернатанты собирали, очищали центрифугированием, затем проводили аффинную очистку, инкубируя рекомбинантные белки в течение ночи при 4 ° C с гранулами никель-агарозы (Qiagen - Валенсия, Калифорния) и промывая в пустых колонках для удаления rBV и клеточных белков. Неспецифическое связывание никелевых шариков устраняли промыванием 10 мМ имидазолом (Sigma - Сент-Луис, Миссури) и рекомбинантным белком, элюированным 250 мМ раствором имидазола.Элюцию белка контролировали с помощью УФ-детектора при 280 нм. Имидазол удаляли диализом против PBS (Gibco - Carlsbad, CA).

Очищенные белки разделяли на 10% SDS-PAGE в восстанавливающих условиях (1% меркаптоэтанол), затем блотировали и анализировали вестерн-блоттингом с использованием сыворотки анти-A / Aichi / 2/68, моноклонального антитела против 6xHis (Qiagen - Valencia, CA ) и окрашивание кумасси синим (Biorad - Hercules, CA). Вестерн-блоттинг был разработан с использованием субстрата ECL-Plus (BioRad - Hercules, Калифорния).

Сшивание бис [сульфосукцинимидил] суберата (BS3)

Олигомерный статус очищенных рекомбинантных белков определяли с использованием водорастворимого сшивающего агента BS3 (Pierce-Rockford, IL). Сшивание проводили, как описано De Fillette et al [42], со следующими модификациями. Вкратце, 1 мкг рекомбинантного белка инкубировали при комнатной температуре в присутствии BS3 (конечная концентрация - 3 мМ) в течение 30 минут. Сшивание останавливали добавлением 1М трис-HCl pH 8.0 до конечной концентрации 50 мМ. После сшивания белки разделяли на 5–15% SDS-PAGE в восстанавливающих условиях (1% меркаптоэтанол), затем блотировали и анализировали вестерн-блоттингом с использованием антитела против 6xHis и проявляли с помощью ECL-Plus.

Сэндвич ELISA

Сэндвич-ELISA выполняли, как описано Vanlandschoot et al [31], [33], с модификациями. Вкратце, 96-луночные иммунопланшеты (Nunc) были покрыты поликлональной сывороткой морских свинок против A / Aichi / 2/68 (0,02 мкг / мл) (BEI Resources).После трех промывок (0,05% твин-20 в PBS) лунки блокировали 3% BSA в промывочном буфере в течение 2 часов при 37 ° C с последующими тремя промываниями. Рекомбинантные белки добавляли в каждую лунку (20 мкг / мл в PBS) и инкубировали в течение 1,5 часов при 37 ° C с последующими тремя промываниями. Для определения связывания антител добавляли 2-кратные серийные разведения (PBS) сывороток против гриппа A / Aichi / 2/68 (мыши), LC89 или HC67 (любезный подарок Дэвида Стейнхауэра) и инкубировали в течение 1,5 часов при 37 ° C. ° C с последующими тремя промывками. Лунки инкубировали с козьим антимышиным IgG, конъюгированным с пероксидазой хрена (1-500 в PBS) в течение 1.5 часов при 37 ° C, затем три промывки. Субстрат OPD добавляли в каждую лунку и давали возможность проявиться цвету. Развитие окраски останавливали с помощью 1 М фосфорной кислоты. Поглощение измеряли при 450 нм на считывающем устройстве для микропланшетов Biorad Model 680.

Вакцинация и серологические иммунные ответы

Самок мышей Balb / c (возраст 6–9 недель) (Harlan Laboratories) слегка анестезировали смесью ксилазина и кетамина и подкожно вакцинировали 3 мкг sHA, sHA.GCN4pII или PBS (наивно) в день 0 и день. 21.Затем у мышей брали ретроорбитальную кровь на 21 и 42 день и собирали сыворотку для тестов на ингибирование гемагглютинации (HAI) и ELISA на Ig.

На сыворотках вакцинированных животных было проведено

тестов HAI в соответствии с протоколом ВОЗ [43]. Вкратце, сыворотку обрабатывали разрушающим рецептор ферментом (Denka Seiken Co. Ltd, Токио, Япония) в течение 16 часов при 37 ° C, затем инактивировали нагреванием в течение 30 минут при 56 ° C. Обработанные сыворотки разводили до конечной концентрации 1∶10 в PBS и инкубировали с упакованными эритроцитами цыплят в течение 1 часа при 4 ° C для удаления криоглобулинов.Обработанные сыворотки серийно разводили и инкубировали с 4 единицами НА вируса A / Aichi / 2/68 в течение 30 минут при комнатной температуре. В каждую лунку добавляли равный объем 0,5% куриных эритроцитов и инкубировали в течение 30 минут при комнатной температуре. Титр HAI считался обратной величиной самого высокого разведения сыворотки, которое ингибировало гемагглютинацию. Значения были выражены как среднее геометрическое с доверительным интервалом 95%.

Вирус и вызов

Для определения эффективности вакцины вакцинированных мышей слегка анестезировали изофлуораном и заражали интраназальной инокуляцией 50 мкл 5 x LD50 адаптированных живых мышей A / Aichi / 2/68.Потери веса и выживаемость контролировали ежедневно в течение 14 дней после заражения. В качестве конечной точки использовалась потеря веса ≥25%, и мышей умерщвляли в соответствии с рекомендациями IACUC.

Статистический анализ

Статистический анализ был выполнен с использованием одностороннего анализа ANOVA сгруппированных данных с помощью программного обеспечения GraphPad Prism5. Кривые выживаемости анализировали с использованием лог-рангового теста. Все данные следовали нормальному гауссовскому распределению, если не указано иное. Значение P менее 0,05 было определено как значимое различие.

Благодарности

Мы благодарим Эрин-Джой Коллинз за ее ценную помощь в подготовке рукописи и Дэвида Стейнхауэра за ген гемагглютинина A / Aichi / 2/68 и моноклональные антитела HC67 и LC89.

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: WCW BZW RWC. Проведены эксперименты: WCW MPM. Проанализированы данные: WCW BZW. Внесенные реактивы / материалы / инструменты анализа: DGK IS RWC. Написал статью: WCW MPM RWC.

Список литературы

  1. 1.CDC (2010) 5-я неделя сезона гриппа 2009–2010 гг., Завершающаяся 6 февраля 2010 г. Доступно: http://www.cdc.gov/flu/weekly/.
  2. 2. Johansson BE, Brett IC (2007) Изменение взглядов на иммунизацию против гриппа. Vaccine 25: 3062–3065.
  3. 3. Brett IC, Johansson BE (2005) Иммунизация против вируса гриппа A: сравнение обычных инактивированных, живых аттенуированных и рекомбинантных бакуловирусных вакцин, продуцируемых очищенным гемагглютинином и нейраминидазой, в модельной системе на мышах.Вирусология 339: 273–280.
  4. 4. Ван К., Хольц К.М., Андерсон К., Чубет Р., Махмуд В. и др. (2006) Экспрессия и очистка гемагглютинина гриппа - на один шаг ближе к вакцине против гриппа на основе рекомбинантных белков. Vaccine 24: 2176–2185.
  5. 5. Treanor JJ, Schiff GM, Hayden FG, Brady RC, Hay CM и др. (2007) Безопасность и иммуногенность вакцины против гриппа гемагглютинина, экспрессируемой бакуловирусом: рандомизированное контролируемое исследование. JAMA 297: 1577–1582.
  6. 6. Кост Т.А., Кондрей Дж. П., Джарвис Д. Л. (2005) Бакуловирус как универсальные векторы для экспрессии белка в клетках насекомых и млекопитающих. Природная биотехнология 32: 567–575.
  7. 7. Treanor JJ, Schiff GM, Couch RB, Cate TR, Brady RC и др. (2006) Дозозависимая безопасность и иммуногенность трехвалентной вакцины на основе гемагглютинина вируса гриппа, экспрессируемой бакуловирусом, у пожилых людей. J Infect Dis 193: 1223–1228.
  8. 8. King JC Jr, Cox MM, Reisinger K, Hedrick J, Graham I, et al.(2009) Оценка безопасности, реактогенности и иммуногенности трехвалентной рекомбинантной бакуловирусной вакцины против гриппа FluBlok, вводимой внутримышечно здоровым детям в возрасте 6-59 месяцев. Vaccine 27: 6589–6594.
  9. 9. де Фриз Р.П., де Вриз Э., Бош Б.Дж., де Гроот Р.Дж., Роттье П.Дж. и др. (2010) Состояние гликозилирования гемагглютинина вируса гриппа А влияет на специфичность связывания рецептора. Вирусология 403: 17–25.
  10. 10. Wei CJ, Xu L, Kong WP, Shi W, Canis K и др.(2008) Сравнительная эффективность нейтрализующих антител, вызванных рекомбинантными белками гемагглютинина из вируса птичьего гриппа H5N1. J Virol 82: 6200–6208.
  11. 11. Wilson IA, Cox NJ (1990) Структурные основы иммунного распознавания гемагглютинина вируса гриппа. Анну Рев Иммунол 8: 737–771.
  12. 12. Wiley DC, Skehel JJ (1987) Структура и функция гемагглютининового мембранного гликопротеина вируса гриппа. Анну Рев Биохим 56: 365–394.
  13. 13.Skehel JJ, Wiley DC (2000) Связывание рецепторов и слияние мембран при проникновении вируса: гемагглютинин гриппа. Анну Рев Биохим 69: 531–569.
  14. 14. Webby RJ, Webster RG, Richt JA (2007) Вирусы гриппа в популяциях диких животных. Curr Top Microbiol Immunol 315: 67–83.
  15. 15. Carrat F, Flahault A (2007) Вакцина против гриппа: проблема антигенного дрейфа. Vaccine 25: 6852–6862.
  16. 16. O'Shea EK, Rutkowski R, Kim PS (1989) Доказательства того, что лейциновая молния представляет собой спиральную спираль.Наука 243: 538–542.
  17. 17. Harbury PB, Zhang T, Kim PS, Alber T (1993) Переключение между двух-, трех- и четырехцепочечными спиральными спиралями у мутантов лейциновой молнии GCN4. Science 262: 1401–1407.
  18. 18. Панчера М., Лебовиц Дж., Шон А., Чжу П., Фрейре Э и др. (2005) Растворимые миметики вирусных спайков вируса иммунодефицита человека 1 типа, полученные заменой нативного домена тримеризации на мотив гетерологичной тримеризации: характеристика и анализ связывания лиганда.J Virol 79: 9954–9969.
  19. 19. Davies GE, Stark GR (1970) Использование диметилсуберимидата, сшивающего реагента, при изучении субъединичной структуры олигомерных белков. Proc Natl Acad Sci U S A 66: 651–656.
  20. 20. Ruigrok RW, Aitken A, Calder LJ, Martin SR, Skehel JJ, et al. (1988) Исследования структуры гемагглютинина вируса гриппа при pH слияния мембран. J Gen Virol 69 (Pt 11): 2785–2795.
  21. 21. Кроуфорд Дж., Уилкинсон Б., Воснесенский А., Смит Дж., Гарсия М. и др.(1999) Гемагглютининовые вакцины на основе бакуловируса защищают от летальных инфекций гриппа птичьими подтипами H5 и H7. Vaccine 17: 2265–2274.
  22. 22. Hobson D, Curry RL, Beare AS, Ward-Gardner A (1972) Роль сывороточного антитела, ингибирующего гемагглютинацию, в защите от заражения вирусами гриппа A2 и B. Дж. Хиг (Лондон) 70: 767–777.
  23. 23. Хубер В.К., МакКеон Р.М., Брэкин М.Н., Миллер Л.А., Китинг Р. и др. (2006) Отчетливый вклад индуцированного вакциной иммуноглобулина G1 (IgG1) и антител IgG2a в защитный иммунитет против гриппа.Clin Vaccine Immunol 13: 981–990.
  24. 24. Финкельман Ф. Д., Холмс Дж., Катона И. М., Урбан Дж. Ф. младший, Бекманн М. П. и др. (1990) Лимфокиновый контроль выбора изотипа иммуноглобулина in vivo. Анну Рев Иммунол 8: 303–333.
  25. 25. Neumann G, Noda T, Kawaoka Y (2009) Возникновение и пандемический потенциал вируса гриппа h2N1 свиного происхождения. Природа 459: 931–939.
  26. 26. Ян Х, Флорин Л., Фарзан М., Колчинский П., Квонг П.Д. и др. (2000) Модификации, стабилизирующие тримеры гликопротеинов оболочки вируса иммунодефицита человека в растворе.J Virol 74: 4746–4754.
  27. 27. Yin HS, Wen X, Paterson RG, Lamb RA, Jardetzky TS (2006) Структура белка 5 F вируса парагриппа в его метастабильной префузионной конформации. Природа 439: 38–44.
  28. 28. Wilson IA, Skehel JJ, Wiley DC (1981) Структура гликопротеина гемагглютининовой мембраны вируса гриппа при разрешении 3 A. Природа 289: 366–373.
  29. 29. Smith CA, Barnett BC, Thomas DB, Temoltzin-Palacios F (1991) Структурное назначение новых и иммунодоминантных антигенных сайтов в нейтрализующем ответе антител мышей CBA / Ca на гемагглютинин гриппа.J Exp Med 173: 953–959.
  30. 30. Скехел Дж. Дж., Бейли П. М., Браун Э. Б., Мартин С. Р., Уотерфилд, доктор медицины и др. (1982) Изменения конформации гемагглютинина вируса гриппа при оптимуме pH вирус-опосредованного слияния мембран. Proc Natl Acad Sci U S A 79: 968–972.
  31. 31. Vanlandschoot P, Beirnaert E, Neirynck S, Saelens X, Jou WM, et al. (1996) Молекулярная и иммунологическая характеристика растворимого агрегированного гемагглютинина вируса гриппа A / Victoria / 3/75 (h4N2), экспрессированного в клетках насекомых.Arch Virol 141: 1715–1726.
  32. 32. Johansson BE (1999) Иммунизация гемагглютинином и нейраминидазой вируса гриппа А, продуцируемыми рекомбинантным бакуловирусом, приводит к сбалансированному и расширенному иммунному ответу, превосходящему обычную вакцину. Вакцина 17: 2073–2080.
  33. 33. Vanlandschoot P, Beirnaert E, Grooten J, Jou WM, Fiers W (1998) pH-зависимая агрегация и секреция растворимого мономерного гемагглютинина гриппа. Arch Virol 143: 227–239.
  34. 34.Treanor JJ, Wilkinson BE, Masseoud F, Hu-Primmer J, Battaglia R, et al. (2001) Безопасность и иммуногенность рекомбинантной гемагглютининовой вакцины против гриппа H5 у людей. Vaccine 19: 1732–1737.
  35. 35. Корнелиссен Л.А., де Фрис Р.П., де Бур-Луйтце Е.А., Ригтер А., Роттье П.Дж. и др. (2010) Однократная иммунизация растворимым рекомбинантным тримерным гемагглютинином защищает цыплят от высокопатогенного вируса птичьего гриппа H5N1. PLoS One 5: e10645.
  36. 36.Doherty PC, Topham DJ, Tripp RA, Cardin RD, Brooks JW и др. (1997) Эффекторные CD4 + и CD8 + Т-клеточные механизмы в борьбе с респираторными вирусными инфекциями. Immunol Rev 159: 105–117.
  37. 37. Heyman B (2000) Регулирование ответов антител через антитела, комплемент и рецепторы Fc. Анну Рев Иммунол 18: 709–737.
  38. 38. Hocart MJ, Mackenzie JS, Stewart GA (1989) Ответы подкласса IgG на гемагглютинин вируса гриппа у мышей: влияние пути инокуляции.J Gen Virol 70 (Pt 4): 809–818.
  39. 39. Ronnelid J, Ahlin E, Nilsson B, Nilsson-Ekdahl K, Mathsson L (2008) Продукция цитокинов, опосредованная иммунным комплексом, регулируется классической активацией комплемента как in vivo, так и in vitro. Adv Exp Med Biol 632: 187–201.
  40. 40. Несторович А.Н., Белый Д.О., Джексон Д.К. (1985) Конформационные изменения гемагглютинина вируса гриппа и его мономера, обнаруживаемые с помощью моноклональных антител. Вакцина 3: 175–181.
  41. 41.Ван Б.З., Лю В., Кан С.М., Алам М., Хуанг С. и др. (2007) Включение высоких уровней гликопротеинов оболочки химерного вируса иммунодефицита человека в вирусоподобные частицы. J Virol 81: 10869–10878.
  42. 42. Де Филетт М., Мартенс В., Рус К., Деру Т., Вервалле Ф. и др. (2008) Вакцина против гриппа A на основе тетрамерного эктодомена матричного белка 2. J Biol Chem 283: 11382–11387.
  43. 43. Всемирная организация здравоохранения (2002 г.) Руководство ВОЗ по диагностике и эпиднадзору за гриппом животных.Доступно: http://www.wpro.who.int/NR/rdonlyres/EFD2B9A7-2265-4AD0-BC98-97937B4FA83C/0/manualonanimalaidiagnosisandsurveillance.pdf.

ТРЕГАЛОЗА

ТРЕГАЛОЗА

ВОЗ ПИЩЕВЫЕ ДОБАВКИ СЕРИИ 46: ТРЕГАЛОЗА

Первый проект подготовил
Д-р П.Дж. Эбботт
Австралия - Управление по контролю за продуктами питания Новой Зеландии, Канберра, Австралия
и
Д-р Дж. Чен
Институт питания и пищевой гигиены Китайской академии профилактической медицины, Пекин, Китай

1.ПОЯСНЕНИЕ

Трегалоза - это дисахарид, который в природе встречается у насекомых, растений, грибов и бактерий. Основной диетический источник - грибы. Трегалоза используется в хлебобулочных изделиях, напитках, кондитерских изделиях, фруктовом джеме, хлопьях для завтрака, рисе и лапше в качестве текстуризатора, стабилизатора, увлажнителя или добавки в рецептуру с низкой интенсивностью подслащивания. Трегалоза ранее не рассматривалась Комитетом.

2. БИОЛОГИЧЕСКИЕ ДАННЫЕ

2.1 Биохимические аспекты

2.1.1 Поглощение и распределение

В общем, судьба проглоченной или парентерально введенной трегалозы соответствует судьбе глюкозы, поскольку трегалоза быстро гидролизуется до глюкозы под действием фермента трегалозы. Треалаза обнаруживается у людей и большинства животных на щеточной кайме слизистой оболочки кишечника, а также в почках, печени и плазме крови (Hore & Messer, 1968; van Handel, 1970; Demelier et al., 1975; Labat- Роберт, 1982; Niederst & Dauça, 1985; Eze, 1989; Riby et al., 1990; Йошида, 1993). Активность треалазы была обнаружена в тонком кишечнике человека, мышей, крыс, морских свинок, кроликов, свиней и бабуинов (Cerda et al., 1972; Hietanen, 1973; Ruppin et al., 1974; Maestracci, 1976; Garland , 1989). В тонком кишечнике кошек трехалазная активность не обнаружена (Hore & Messer, 1968; Hietanen, 1973; Garland, 1989).

Очень немногие люди имеют дефицит треалазы, который может быть наследственным или приобретенным. Однако в Гренландии распространенность дефицита треалазы составляет 8%, что значительно выше, чем в других странах (Dahlqvist, 1974; Gudmand-Høyer et al., 1988). Частота возникновения дефицита треалазы ниже, чем дефицита лактазы, который в Соединенном Королевстве составляет 3,26% (Gudmand-Høyer & Skovbjerg, 1996). Когда такие люди проглатывают трегалозу, она либо переваривается не полностью, либо не переваривается, и небольшая часть (приблизительно 0,5%) может абсорбироваться путем пассивной диффузии, как показано для других дисахаридов (van Elburg et al., 1995). Поглощенная трегалоза может затем метаболизироваться до глюкозы в печени или почках или выводиться в неизмененном виде с мочой (Demelier et al., 1975). Неабсорбированная трегалоза, вероятно, ферментируется микрофлорой кишечника с образованием короткоцепочечных жирных кислот, таких как ацетат, пропионат и бутират.

При исследовании относительного всасывания трегалозы и глюкозы как показателя мальабсорбции 50 здоровым добровольцам давали 50 г трегалозы или 50 г глюкозы в разные дни, а концентрацию глюкозы в крови проверяли перед лечением и 15, 20, 60, 90 и 120 мин после лечения. Долю трегалозы, абсорбированной в виде глюкозы в течение первых 60 минут, рассчитывали из отношения площади под кривой концентрации глюкозы в крови во времени после введения трегалозы и после введения глюкозы.Для нормальных людей наблюдаемое соотношение колеблется от 0,3 до 1,5 со средним значением 0,7 (Bergoz et al., 1973). Аномальное соотношение (<0,26) было связано с нарушением всасывания в результате заболевания тонкой кишки. В аналогичном исследовании, проведенном с девятью пациентами с хронической почечной недостаточностью, абсорбция трегалозы по отношению к глюкозе составила 0,83 (Pointner et al., 1974).

При исследовании корреляции между пероральным приемом различных сахаров и выдохом водорода 60 здоровых добровольцев получили 50 г трегалозы в 400 мл воды.Кровь собирали для определения глюкозы до лечения и через 30, 60, 90 и 120 минут после лечения. Сообщенная скорость абсорбции (медиана 0,7) указывает на то, что трегалоза не полностью переваривается до глюкозы в тонком кишечнике (Heine et al., 1996).

2.1.2 Биотрансформация и экскреция

Трегалоза, попадающая в циркулирующую кровь, превращается в глюкозу под действием треалазы в сыворотке, почках, печени и желчи, в зависимости от вида (van Handel, 1969; Labat-Robert, 1982; Arola et al., 1999). Трегалоза, которая не превращается в глюкозу, выделяется с мочой крыс, морских свинок и птиц, у которых отсутствует почечная треалаза. У мышей, кроликов, собак, свиней и людей можно ожидать, что треалаза в щеточной кайме проксимальных канальцевых клеток почек расщепляет выделяемую трегалозу до глюкозы (Demelier et al., 1975; Niederst & Dauça, 1985; Riby и др., 1990).

При исследовании метаболизма абсорбированной трегалозы группам крыс, морских свинок и кроликов внутривенно вводили дозу 0.5 или 1 г / кг массы тела. У крыс 87% введенной дозы выделялось с мочой, что указывает на то, что активность треалазы в печени и почках незначительна или отсутствует. У морских свинок и кроликов только 79% введенной дозы выводилось с мочой. Исследование концентрации трегалозы в почечной артерии и вене кроликов показало, что она эффективно гидролизуется в почках (Demelier et al., 1975).

При исследовании активности трегалозы в почках кроликам внутривенно вводили 500 мг трегалозы, что соответствует 200300 мг / кг массы тела.Трегалоза была выведена из плазмы в течение 60 минут, и в моче не обнаружено. Напротив, у крыс, которым вводили 100 мг трегалозы внутривенно (для дозы около 300 мг / кг массы тела), трегалоза выводилась из плазмы с той же скоростью, что и у кроликов, но обнаруживалась в моче пропорционально концентрации в плазме. Это указывает на отсутствие метаболизма трегалозы в почках у крыс (Riby et al., 1990).

В исследовании парентерального применения трегалозы в качестве источника сахарида группам кроликов вводили внутривенные дозы трегалозы (10% раствор), мальтозы (10% раствор) или глюкозы (5% раствор) в течение 90 минут при 6.7 мл / кг массы тела в час. Кровь собирали до лечения и через 30, 60, 90, 120 и 180 мин. Инфузия трегалозы приводила к быстрому увеличению концентрации глюкозы в сыворотке, которая возвращалась к норме через 90 минут после прекращения инфузии. Только около 1% введенной трегалозы было извлечено с мочой (Sato et al., 1999).

2.2 Токсикологические исследования

2.2.1 Острая токсичность

Острая токсичность трегалозы была исследована на мышах, крысах и собаках. Результаты сведены в Таблицу 1, а более подробная информация приведена ниже.

Таблица 1. Острая токсичность трегалозы для животных мужского и женского пола

Виды

Маршрут

LD 50 (мг / кг массы тела)

Номер ссылки

Мышь

Устный

> 5 000

Аткинсон и Томас (1994a)

Мышь

Внутривенное

> 1 000

Аткинсон и Томас (1994a)

Крыса

Устный

> 16 000

Макрей (1995)

Крыса

Устный

> 5 000

Аткинсон и Томас (1994b)

Крыса

Внутривенное

> 1 000

Аткинсон и Томас (1994b)

Собака

Устный

> 5 000

Аткинсон и Томас (1994c)

Собака

Внутривенное

> 1 000

Аткинсон и Томас (1994c)

Группы из пяти самцов и пяти самок мышей CD-1 и крыс Sprague-Dawley получали однократную дозу трегалозы из расчета 1 г / кг массы тела путем внутривенной инъекции в хвостовую вену или 5 г / кг массы тела через желудочный зонд.Контрольная группа каждого вида получала внутривенные или пероральные дозы стерильного физиологического раствора в тех же объемах. Четыре самца гончей получили однократную дозу трегалозы из расчета 1 г / кг массы тела путем внутривенной инъекции в головную вену. После периода выздоровления в течение 6 дней перорально в капсулах вводили 5 г / кг массы тела. За всеми животными всех видов дважды в день наблюдали на предмет признаков токсичности, и через определенные промежутки времени брали кровь для определения концентрации глюкозы в сыворотке. В исследованиях на мышах и крысах сателлитные группы, состоящие из пяти животных каждого пола на группу, обрабатывались так же, как и группы лечения, а кровь и моча собирались для анализа на глюкозу и трегалозу.

Мыши не проявляли признаков токсичности после введения каким-либо путем, а также не было никаких связанных с лечением изменений массы тела в течение 14-дневного периода наблюдения. Через 30 мин после перорального приема трегалозы концентрации глюкозы в сыворотке крови немного, но значительно повысились, но впоследствии были сопоставимы. Трегалоза обнаруживалась в плазме и моче после внутривенного введения, а в моче - только после приема внутрь. Концентрация глюкозы в моче повышалась после введения любым путем (Atkinson & Thomas, 1994a).

Крысы не проявляли признаков токсичности после введения каким-либо путем, а также не было никаких связанных с лечением изменений массы тела в течение 14-дневного периода наблюдения. Небольшое увеличение концентрации глюкозы в сыворотке наблюдалось в течение первых 2 часов после перорального приема, но никаких изменений в плазме не наблюдалось. Трегалоза обнаруживалась в плазме и моче после внутривенного введения, а в моче - только после приема внутрь. Концентрация глюкозы в моче повышалась после введения любым путем (Atkinson & Thomas, 1994b).

У собак не наблюдалось никаких признаков токсичности после введения каким-либо путем, а также не было никаких связанных с лечением изменений массы тела в течение 7-дневного периода наблюдения. Незначительные, но временные изменения концентрации глюкозы в сыворотке наблюдались после введения любым путем. Трегалоза обнаруживалась в плазме после любого пути введения, но в моче только после внутривенного введения. Концентрация глюкозы в моче повышалась после введения любым путем (Atkinson & Thomas, 1994c).

В отдельном исследовании пяти самцам и пяти самкам крыс Sprague-Dawley давали трегалозу перорально в дозе 16 г / кг массы тела. Не было смертей и клинических признаков токсичности (McRae, 1995).

Трегалозу закапывали в объеме 0,1 мл 10% раствора в правый глаз каждого из шести новозеландских белых кроликов. Левый глаз каждого животного использовали в качестве контроля, и каждый глаз оценивали на предмет раздражения через 1, 24, 48 и 72 часа после нанесения. Исследование было прекращено на 4-й день.Не было случаев смерти или признаков системной токсичности, а также признаков раздражения роговицы, радужной оболочки или конъюнктивы. В условиях этого анализа трегалоза не вызывала раздражения глаз (Atkinson & Thomas, 1994d).

2.2.2 Краткосрочные исследования токсичности

Мыши

В ходе 14-дневного исследования группам по 10 мышей CD-1 каждого пола давали трегалозу (чистота не указана) перорально в дозе 5 г / кг массы тела в день через желудочный зонд, подкожно в дозе 2,5 мг / кг. м.т. в сутки или внутривенно в хвостовую вену в дозе 1 г / кг м.т. в сутки.За животными наблюдали в течение всего исследования, регистрировали массу тела и через определенные промежутки времени собирали кровь для гематологических и клинических химических оценок. Мышей умерщвляли на 15-й день, а различные ткани сохраняли для гистологического исследования.

Одно животное умерло на 6-й день после внутривенного введения, но в предыдущие дни не было никаких клинических признаков, и результаты вскрытия не были примечательными. Не было никаких связанных с лечением клинических признаков токсичности или связанных с лечением эффектов на массу тела.Потребление пищи было нормальным во всех группах. Концентрация глюкозы в сыворотке крови немного повысилась после внутривенного или подкожного лечения, но быстро вернулась к норме. Этот эффект считался временным, и лечение не приводило к накоплению глюкозы. Количество лейкоцитов у мужчин снизилось через 14 дней после перорального или подкожного введения, и это было связано с уменьшением общего количества лимфоцитов. Аналогичное снижение произошло после внутривенного введения, но не было статистически значимым.Ни в одной группе не было сопутствующих гистопатологических изменений костного мозга и гематологических изменений у женщин. Незначительное увеличение концентрации натрия и калия наблюдалось у мужчин, получавших лечение всеми тремя способами. Концентрация фосфора также увеличивалась у мужчин после подкожного введения. У мужчин, получавших перорально, снизился уровень азота мочевины в крови и повысился уровень альбумина и общего белка. Макроскопические изменения наблюдались только у животных, получавших внутривенное введение, и у них был ограничен хвост.Гистологическое исследование тканей не выявило каких-либо замечательных результатов (Atkinson & Thomas, 1994e).

Групп по 20 мышей HanIbm.NMRL каждого пола кормили гранулированной поддерживающей диетой, к которой добавляли трегалозу (чистота 99,2%) в концентрации 0, 5000, 15000 или 50000 мг / кг (равная 0, 760, 2200 или 7300 мг / кг веса тела в день для мужчин и 0, 910, 2700 или 9300 мг / кг веса тела в день для женщин) в течение 13 недель. За мышами ежедневно наблюдали клинические признаки токсичности, массу тела измеряли еженедельно, и перед лечением и на 13-й неделе у контрольных животных и животных, получавших высокие дозы, проводили офтальмоскопические исследования.Образцы крови и мочи были собраны через 5, 9 и 13 недель для клинической биохимии, гематологии и анализа мочи. На 13 неделе животных вскрыли и собрали ряд тканей и органов. Образцы тканей контрольных животных и животных, получавших высокие дозы, а также животных, умерших во время исследования, исследовали гистологически.

Два животных в контрольной группе, одно при низкой дозе и одно при высокой дозе, погибли во время лечения, но эти смерти считались не связанными с лечением.Признаков токсичности, связанных с лечением, и офтальмоскопических изменений, связанных с лечением, не было. Масса тела мышей-самцов при применении двух более высоких доз была немного снижена на протяжении всего периода исследования, но масса тела мышей, получавших самую высокую дозу, была значительно снижена только на 12-й неделе. Масса тела самок была одинаковой во всех группах. Лечение не повлияло на гематологические параметры, наблюдались только спорадические изменения. Небольшое увеличение концентрации глюкозы в плазме наблюдалось у мужчин и женщин при высокой дозе на 5, 9 и 13 неделе.У самок эта разница была статистически значимой на 5-й и 9-й неделях. Животные, получавшие две более низкие дозы, также показали небольшое увеличение концентрации глюкозы в крови на 5-й и 9-й неделях, но разница была статистически значимой только у самок при средней дозе на неделе. 9. Концентрация билирубина в плазме была значительно снижена у мужчин и женщин при наивысшей дозе в течение 5-й недели и у мужчин только на 9-й неделе. Концентрация кальция в плазме была значительно снижена у мужчин и женщин при двух более высоких дозах только на 13-й неделе.Концентрация фосфора в плазме была незначительно, но значительно увеличена у мужчин и женщин при максимальной дозе на 5-й неделе и у женщин при двух более высоких дозах на 9-й неделе. Небольшое, но незначительное увеличение концентрации фосфора в плазме наблюдалось как у мужчин, так и у женщин на неделе. 13; однако влияние лечения на концентрацию фосфора в плазме маловероятно. Концентрацию калия в плазме можно было измерить только на 13 неделе (из-за недостаточного количества крови), и статистически значимое снижение наблюдалось у мужчин при двух более высоких дозах и у женщин при наивысшей дозе.Не было обнаружено влияний на параметры мочеиспускания, связанных с лечением.

Не было никакого воздействия на вес или внешний вид органов, связанное с лечением. Гистологическое исследование широкого спектра тканей не выявило эффектов, связанных с лечением. Хотя в этом исследовании наблюдались спорадические изменения клинических параметров, они не показали последовательной картины, связанной с лечением. УНВЭ составлял 50 000 мг / кг рациона, что равняется 7300 мг / кг массы тела в день, это самая высокая испытанная доза (Schmid et al., 1998).

Собаки

В ходе 14-дневного исследования группам из трех гончих каждого пола давали трегалозу (чистота не указана) перорально в дозе 5 г / кг массы тела в день в капсулах, подкожно при 0.25 г / кг веса тела в день или внутривенно из расчета 1 г / кг веса тела в день в головную вену. Контрольная группа получала пустые капсулы ежедневно в течение 14 дней. Животных ежедневно проверяли на признаки токсичности и еженедельно взвешивали. Кровь собирали для гематологии и клинической химии.

Во время исследования смертей не произошло, и животные, получавшие лечение внутривенно, не проявили признаков токсичности. У всех собак, получавших перорально, наблюдалась диарея, и одна контрольная и две самки срыгнули капсулу.У одного мужчины, которого лечили подкожно, однажды была диарея. Масса тела и изменения массы тела были одинаковыми у обработанных и контрольных животных. Эффекта на потребление пищи, связанного с лечением, не наблюдалось. Концентрации глюкозы в сыворотке были нормальными во всех группах, за исключением небольшого увеличения в течение первого часа после внутривенного введения.

Гематологические параметры были нормальными после перорального или подкожного лечения. У мужчин наблюдалось небольшое, но значительное снижение количества эритроцитов, а у женщин - снижение среднего корпускулярного объема и средней концентрации корпускулярного гемоглобина.Через 14 дней существенных изменений не наблюдалось. Небольшое увеличение азота мочевины в крови наблюдалось у женщин, получавших перорально, но поскольку никаких изменений не было отмечено у мужчин, получавших перорально, или у мужчин или женщин, получавших подкожно, значимость этого результата сомнительна. У отдельных животных наблюдались спорадические макроскопические изменения, но они не были связаны с лечением. Гистологические находки не примечательны (Atkinson & Thomas, 1994f).

2.2.3 Генотоксичность

Результаты тестов на генотоксичность трегалозы приведены в таблице 2.

Таблица 2. Результаты тестов на генотоксичность трегалозы

Конечная точка

Контрольный объект

Концентрация

Результат

Номер ссылки

Обратная мутация

S. typhimurium TA1535, TA1537, TA98, TA100; E. coli WP2 uvrA

310, 620, 1250, 2500, 5000 г / пластина a

отрицательный

Китчинг (1995)

Хромосомная аберрация

Клетки яичников китайского хомячка

1250, 2500, 5000 г / мл

a

отрицательный

Уксус (1997a)

Образование микронуклеусов

Самцы и самки мышей

1250, 2500, 5000 мг / кг массы тела

отрицательный

Уксус (1997b)

a

С микросомальной активацией и без нее

2.2.4 Репродуктивная токсичность

(a) Исследования нескольких поколений

Крысы

В исследовании двух поколений группы из 28 крыс линии Вистар каждого пола получали гранулированный поддерживающий рацион, в который добавляли трегалозу (чистота 99%) в концентрации 0,25 000, 50 000 или 100 000 мг / кг. кг, что эквивалентно дозам 0, 1,25, 2,5 и 5 г / кг массы тела в день. Животных поколения F 0 спаривали через 10 недель на диете для получения поколения F 1 и содержали на модифицированной диете до умерщвления после отъема животных F 1 .На 4-й постнатальный день пометы были разделены на группы по четыре животных каждого пола на дозу, а на постнатальный 21-й день детенышей отлучили от груди, и группы по 28 особей каждого пола были случайным образом выбраны для выращивания следующих животных (F ). 2 ) поколения. Животных поколения F 1 лечили так же, как и животных F 0 , и их спаривали через 10 недель для получения поколения F 2 . Всех животных наблюдали на предмет клинических признаков, а репродуктивные и клинические параметры исследовали в каждом поколении.

У животных F 0 или F 1 во время преждевременного спаривания, беременности или кормления не наблюдалось связанных с лечением клинических признаков токсичности. Спорадические различия в массе тела наблюдались между группами в разное время, но без зависимости от дозы; Считалось, что различия не связаны с лечением. Подобные спорадические различия наблюдались в потреблении пищи, но также считались не связанными с лечением. Макроскопическое исследование родительских животных F 0 и F 1 не выявило изменений, связанных с лечением, а гистологическое исследование выбранных тканей не выявило заметных различий.Фертильность и репродуктивные параметры были нормальными в каждом поколении, и было 24, 26, 24, 27 и 23, 25, 25 и 25 беременных самок в контрольной, низких, средних и высоких дозах группы F. 0 и F 1 поколений соответственно. Связанного с лечением воздействия на индекс плодовитости или индекс фертильности не было. Срок беременности был сопоставим во всех группах, как и количество живорожденных детенышей. Индекс беременности составил 100% для всех групп обоих поколений.Значительное увеличение и уменьшение размера помета наблюдалось между группами в поколениях F 0 и F 1 , но эти различия не были связаны с дозой и не были постоянными для разных поколений и поэтому считались не связанными с лечением. Соотношение полов было сопоставимым во всех группах на 1-е и 21-е сутки послеродового периода в обоих поколениях. Количество маленьких и крупных детенышей показало некоторые различия между группами, но эти различия были спорадическими и считались не связанными с лечением.При макроскопическом исследовании не было обнаружено сильно уродливых детенышей и отклонений от нормы. Не было связанных с лечением различий в массе тела или приросте массы тела между контрольной и обработанной группами поколения F 0 или F 1 . УНВЭ составлял 100 000 мг / кг рациона, что эквивалентно 5 г / кг массы тела в день, это самая высокая испытанная доза (Wolterbeek & Waalkens-Berendsen, 1999a).

(b) Токсичность, связанная с развитием

Крысы

Группы из 28 спарившихся самок крыс Wistar получали рационы, содержащие трегалозу (чистота 99%) в концентрации 0,25 000, 50 000 или 100 000 мг / кг, что соответствует среднему потреблению с пищей 0,1.7, 3,5 и 6,9 г / кг массы тела в сутки на 0–21 день беременности. Самок исследовали на протяжении всего исследования на предмет клинических признаков токсичности, а их органы исследовали макроскопически в конце исследования. На 21 день самок умерщвляли, а плоды из контрольной группы и группы с высокими дозами исследовали на висцеральные и скелетные аномалии.

Во время исследования смертей не произошло, а клиническое обследование выявило замечательные результаты только у двух животных, одного из контрольной группы и одного, получавшего высокую дозу, у которых были геморрагические выделения из влагалища на 21 и 14 день беременности, соответственно.Обследование органов не выявило разницы в неблагоприятных изменениях между обработанной и контрольной группами. Средняя масса тела обработанных беременных животных не отличалась от массы тела контрольных животных. Потребление пищи было нормальным во всех группах. Не было обнаружено различий между обработанными и контрольными группами по количеству желтых тел, имплантаций, живых и мертвых плодов, а также по раннему и позднему рассасыванию. Частота пре- и постимплантационной потери плода и соотношение полов у плодов также были схожими.Связанного с лечением воздействия на вес репродуктивных органов или вес тела матери во время беременности не наблюдалось.

Общий анализ плодов выявил значительно меньшее количество крупных плодов у маток при низких и высоких дозах и значительно меньшее количество мелких плодов у плодов при низкой дозе. Эти различия, вероятно, были случайными и не были связаны с лечением. У одного плода в низкой дозе была согнутая задняя конечность, а у одного плода в каждой из контрольной группы и группы высокой дозы был нитевидный хвост.Никаких других макроскопических поражений не наблюдалось. Средний вес плода и плаценты был сходным у обработанных и контрольных животных. Висцеральное обследование плодов в контрольной группе и группах с высокими дозами не выявило пороков развития, а также не было значительных различий в частоте висцеральных аномалий и вариаций. Скелетное обследование плодов не выявило пороков развития в контрольной группе и группах высоких доз. Частота скелетных аномалий и вариаций была нормальной, и не было различий в частоте встречаемости в контрольной группе и группах с высокими дозами.Никаких различий в окостенении скелета не наблюдалось, за исключением небольшого, но значимого различия в частоте окостенения фаланг задних конечностей. При отсутствии эффектов на других участках, это различие считалось не связанным с лечением. УНВЭ составлял 100 000 мг / кг рациона, что равняется 6,9 г / кг массы тела в день, это самая высокая испытанная доза (Waalkens-Berendsen, 1998).

Кролики

Группы из 16 спарившихся новозеландских белых кроликов получали рационы, содержащие трегалозу (чистота 99%) в концентрации 0, 25 000, 50 000 или 100 000 мг / кг, что соответствует потреблению 0,0.77, 1,3 и 2,8 г / кг веса тела в день на 07-й день беременности, которые были уменьшены до 0, 0,21, 0,48 и 1,0 мг / кг веса тела в день на 2129 день беременности. На 29 день беременности самок умерщвляли и исследовали макроскопически, а плоды исследовали на висцеральные и скелетные пороки развития.

Во время обработки не было никаких связанных с лечением признаков токсичности плотин. При общем обследовании органов и тканей не было выявлено никаких изменений, связанных с лечением, и никаких связанных с лечением различий в массе тела не было обнаружено.Потребление пищи было нормальным во всех группах, но уровень потребления трегалозы снизился во всех группах во время беременности. Индекс плодовитости составлял 75, 75, 87 и 81% для контрольных, низких, средних и высоких доз соответственно. Количество желтых тел, имплантации, живых и мертвых плодов, ранней и поздней резорбции, а также пре- и постимплантационных потерь, а также соотношение полов у плодов не отличалось от контроля. Вес органов и изменения веса матери во время беременности были одинаковыми во всех группах.

Обследование плодов не выявило значительных различий между контрольной и обработанной группами в отношении внешних данных, веса плаценты или веса плода. Осмотр внутренних органов плода не выявил пороков развития, аномалий или вариаций, связанных с лечением. Осмотр скелета показал, что у плода контрольной группы сросшиеся ребра. Частота скелетных аномалий была одинаковой между группами. Единственная разница в вариациях скелета заключалась в значительном увеличении частоты добавочных ребер у животных при средней дозе.Никаких различий в группе, получавшей высокие дозы, не наблюдалось. Из-за отсутствия зависимости «доза-ответ» и из-за того, что разница наблюдалась только по пометам, вариация вряд ли связана с лечением. Были замечены случайные, но существенные различия в вариациях окостенения скелета, такие как снижение частоты не полностью окостеневших грудных тел и увеличение частоты появления плодов с неокостеневшими дистальными эпифизами плечевой кости у плодов при средней дозе, но эти изменения были считается не связанным с лечением.УНВЭ составлял 100 000 мг / кг рациона, что равняется 2,8 г / кг массы тела в день, это самая высокая испытанная доза (Wolterbeek & Waalkens-Berendsen, 1999b).

2.2.5 Специальные исследования ферментов, используемых в производстве трегалозы

(a) Карбогидраза (альфа-амилаза) из

Bacillus licheniformis Альфа-амилаза

(EC 3.2.1.1), полученная из Bacillus licheniformis, имеет не указанный ADI 1 (Приложение 1, ссылка 70).

(b) Мальтоолигозил трегалозосинтаза и мальтоолигозил трегалоза трегалогидролаза

Мальтоолигозил трегалозосинтаза (EC 5.4.99.15) и мальто-олигозил трегалоза трегалогидролаза (EC 3.2.1.141) получены из Arthrobacter ramosus (Nakada et al., 1995a, b), который является почвенным микроорганизмом, который обычно считается непатогенным. Токсикологические исследования этих ферментов отсутствовали; однако очистка трегалозы приводит к почти полному удалению белкового материала.

(c) Изоамилаза

Изоамилаза (EC 3.2.1.68) получена из мутантного штамма Pseudomonas amyloderamosa.При исследовании острой токсичности группы из пяти самцов и пяти самок мышей получали 40% водную суспензию изоамилазы в концентрациях от 12 000 до 21 000 мг / кг рациона. ЛД50 составляла примерно 15000 мг / кг рациона (Morimoto et al., 1979)

.

В краткосрочном исследовании токсичности группам по 20 крыс линии Wistar каждого пола через желудочный зонд вводили изоамилазу в дозе 0, 2,3, 5 или 10 мл / кг м.т. в день, что эквивалентно 0, 57, 110, или 230 мг белка на кг массы тела в день, или 0, 4.1, 8,2 или 16 миллионов единиц активности фермента на кг массы тела в день. На протяжении всего исследования животных обследовали на предмет клинических признаков, а массу тела измеряли еженедельно. В конце исследования брали кровь для гематологии и биохимии крови, а также проводили анализ мочи. Офтальмоскопические исследования проводились на контрольных животных и животных, получавших высокие дозы, в начале и в конце исследования. Все животные были вскрыты через 3 месяца, и выбранные ткани были взяты для микроскопического исследования.

Пять животных умерли во время исследования, но смерть не была сочтена связанной с лечением, поскольку у выживших животных не было клинических признаков токсичности. Результаты офтальмоскопического обследования нормальные. Связанных с лечением изменений средней массы тела не было, а потребление пищи и воды было нормальным во всех группах. Значительное увеличение концентрации гемоглобина было обнаружено у женщин при низких и высоких дозах, но отсутствие зависимости от дозы и других гематологических изменений предполагает, что эти изменения не были связаны с лечением.Других различий между контрольной и обработанной группами не было, а также не было значительных различий в клинических химических параметрах или параметрах мочи между контрольной и обработанной группами. При аутопсии не было обнаружено связанных с лечением изменений абсолютного или относительного веса органов, и наблюдались только грубые патологические изменения, связанные с желудочным зондом. Патогистологическое исследование не выявило изменений, связанных с лечением. УНВЭ составлял 10 мл / кг массы тела в сутки, что эквивалентно 230 мг белка на кг массы тела в сутки (Lina, 1999).

Изоамилаза была протестирована на ее способность индуцировать обратную мутацию в локусе his в штаммах Salmonella typhimurium TA1535, TA1537, TA98 и TA100 и в локусе trp в Escherichia coli WP2uvrA с метаболической активацией и без нее в концентрациях 625000 г белка. за тарелку. Изоамилаза не вызывала воспроизводимого увеличения количества ревертантов любого из бактериальных штаммов с метаболической активацией или без нее (van Delft, 1999).

(d) Циклодекстринглюканотрансфераза

Циклодекстринглюканотрансфераза (EC 2.4.1.19) получают из штамма Bacillus stearothermophilus. Данные о токсичности циклодекстрин-глюканотрансферазы из других исходных организмов ранее рассматривались Комитетом в контексте его оценок безопасности бета-циклодекстрина и гамма-циклодекстрина, и никаких опасений не возникло (Приложение 1, ссылки 107, 116 и 138). Безопасность B. stearo-thermophilus как исходного организма рассматривалась ранее в контексте оценки безопасности альфа-амилазы для этого организма (Приложение 1, ссылка 94), в которой был сделан вывод, что B.stearothermophilus не патогенен для людей и животных.

(e) Глюкоамилаза и альфа-амилаза из

Bacillus subtilis

Глюкоамилаза (EC 3.2.1.3), полученная из Aspergillus niger, и альфа-амилаза из Bacillus subtilis были ранее оценены Комитетом (Приложение 1, ссылки 77 и 94). Для глюкоамилазы (амилглюкозидазы) A. niger был установлен ДСП, равный 01 мг общих органических твердых веществ на кг массы тела, а для альфа-амилазы из B.subtilis.

2.3 Наблюдения на людях

2.3.1 Исследования толерантности у здоровых добровольцев

В исследовании потенциальных побочных эффектов 60 здоровым добровольцам дали 50 г трегалозы в 400 мл воды после ночного голодания. О абдоминальных симптомах диареи не сообщалось (Bolte et al., 1973).

В исследовании, в котором 10 добровольцам вводили однократную дозу 25 г трегалозы в 200 мл воды через 1 час после завтрака, не было сообщений о диарее или других абдоминальных симптомах (Heine et al., 1996).

При исследовании слабительной дозы трегалозы 20 студенткам давали однократную суточную дозу трегалозы в 200 мл раствора через 23 часа после еды. Дозу трегалозы постепенно увеличивали с 10 до 20, 30, 40, 50 и 60 г на курс лечения. Неперевариваемый дисахарид лактулозу использовали в качестве положительного контроля. Физическое состояние и желудочно-кишечные симптомы всех субъектов регистрировались до и после лечения. У половины испытуемых не было симптомов со стороны желудочно-кишечного тракта даже при самой высокой испытанной дозе (60 г), тогда как лактулоза вызвала диарею у 75% пациентов после приема 40 г.И трегалоза, и лактулоза вызвали высокую распространенность абдоминальных симптомов, включая метеоризм, вздутие живота и урчание в животе, но эффекты лактулозы были значительно более серьезными, чем эффекты трегалозы в той же дозе. Хотя между индивидуумами наблюдались значительные различия, пороговая доза для преходящего расслабления была оценена в 0,65 г / кг массы тела для трегалозы и 0,26 г / кг массы тела для лактулозы (Oku & Okazaki, 1998).

В исследовании абсорбции трегалозы 30 здоровым взрослым людям (15 каждого пола) давали трегалозу в однократной пероральной дозе 10, 20, 30 или 40 г.Концентрации газообразного водорода в выдыхаемом воздухе и глюкозы в крови измеряли до и каждые 30 минут после введения в течение 3 часов. Считалось, что субъекты страдают мальабсорбцией, если концентрация газообразного водорода в выдыхаемом воздухе увеличивалась более чем на 20 частей на миллион по сравнению со стандартным значением. Испытуемых также обследовали на наличие желудочно-кишечных симптомов (мальабсорбция, абдоминалгия, слабость, абдоминальная дисфория и крепетус). Частота мальабсорбции трегалозы составляла 0%, 40%, 43% и 75% при 10, 20, 30 и 40 г соответственно, в то время как частота желудочно-кишечных симптомов составляла 0%, 40%, 43% и 50%. %.Нарушение всасывания было обнаружено более чем у половины испытуемых, получавших 40 г трегалозы. В то время как между монголоидными (японцами), белыми и черными людьми не наблюдалось расовых различий в способности абсорбировать трегалозу, у японцев частота желудочно-кишечных симптомов была значительно выше (Ushijima et al., 1995).

2.3.2 Исследования лиц с дефицитом треалазы

Сообщалось о нескольких случаях наследственной или приобретенной недостаточности треалазы. Первый - женщина, отметившая, что употребление грибов вызывает диарею перед окончанием еды.Последующий тест на толерантность к трегалозе подтвердил ее непереносимость этого сахара, хотя это могло быть не единственной причиной (Bergoz, 1971). Второй случай был подтвержден биопсией верхней части тощей кишки, которая показала отсутствие кишечной треалазы (Мадзаровова-Нохейлова, 1973). Еще о двух случаях сообщили Bergoz et al. (1982).

Чтобы определить, вызывает ли мальабсорбция трегалозы абдоминальные симптомы, и установить наиболее подходящие диагностические инструменты для различения субъектов с непереносимостью и толерантностью, тест с нагрузкой трегалозы был проведен на 64 субъектах.Людей просили принять 25 г трегалозы после ночного голодания, и измеряли концентрацию глюкозы в крови, водорода и метана в выдыхаемом воздухе. Активность треалазы измеряли в образце биопсии двенадцатиперстной кишки. Из 19 человек, не переносящих грибы, у 13 наблюдалось метеоризм и вздутие живота, а у 6 - диарея; однако относительный дефицит треалазы был обнаружен только у двух субъектов. Концентрации газов в дыхании и глюкозы в крови не различались между группами.Хотя результаты показывают, что симптомы являются лучшим индикатором дефицита треалазы, исследование не включало лечение плацебо, чтобы можно было не сообщать о побочных эффектах со стороны кишечника (Arola et al., 1999).

Частота возникновения дефицита треалазы неизвестна из-за ограниченного количества данных, но сообщается, что она составляет 2% (Bergoz et al., 1982). Однако в других исследованиях случаев непереносимости не было выявлено у 123 (Welsh et al., 1978) и 248 человек (Gudmand-Høyer et al., 1988).

В исследовании по определению нормального диапазона активности треалазы в популяции в Соединенном Королевстве у 400 пациентов с подозрением на мальабсорбцию были взяты образцы биопсии двенадцатиперстной кишки для гистологической оценки и определения треалазы. У 369 пациентов с нормальным гистологическим внешним видом распределение активности треалазы было нормальным (4,8 37 Ед / г белка). Один пациент имел пограничный дефицит треалазы. У 31 пациента с атрофией ворсинок была диагностирована целиакия и значительно снижена активность дисахаридаз, в том числе трегалазы.Когда эти пациенты были переведены на безглютеновую диету, активность мальтазы, сахаразы и треалазы у большинства вернулась к норме, тогда как активность лактазы не восстановилась. Авторы пришли к выводу, что нет никаких оснований для рутинного определения активности треалазы у населения Соединенного Королевства (Murray et al., 2000),

3. РАСЧЕТНЫЙ ДИЕТИЧЕСКИЙ ПРИЕМ

Трегалоза не была одобрена для использования во всем мире, и ее потребление не оценивалось.Однако прогнозы могут быть сделаны на основе допущения о максимальных уровнях использования названных категорий пищевых продуктов в сочетании с отчетными данными о потреблении пищевых продуктов. Потребление трегалозы было предсказано для населения Австралии и США.

Прогнозируемое потребление в Австралии было основано на максимальных уровнях потребления в девяти категориях пищевых продуктов, включая жевательную резинку в качестве кондитерских изделий (таблица 3), и на данных о потреблении пищевых продуктов, полученных в результате национального обследования питания всего населения в возрасте 2 лет и старше. в 1995 году, включая 13 858 индивидуальных диетических записей, основанных на одном 24-часовом воспоминании.Диапазон прогнозируемых поступлений, исходя из предположения, что трегалоза присутствует в нижних и верхних пределах диапазона концентраций, составил 5,79,7 г / день для всех респондентов и 6,511 г / день только для 12 258 потребителей (Управление питания Австралии и Новой Зеландии , 2000).

Таблица 3. Категории пищевых продуктов и концентрации, указанные производителем, и данные о потреблении пищевых продуктов для всего населения (в возрасте 2 лет) Австралии

Пищевая категория

Концентрация
трегалозы (%)

Среднее потребление пищи всеми респондентами (г / день)

3.1,1

Мороженое

10

16

4.3.4

Фруктовые и овощные спреды

1020

4,8

5

Кондитерские изделия

720

10

5.4

Глазурь и глазурь

5

0,1

6,1

Цельнозерновые и дробленые (рис)

2

19

6,4

Мучные изделия (включая макаронные изделия)

2

14

7.2

Печенье, торты и пирожные

510

40

9,2

Рыба обработанная

10

0,3

20

Разное (только начинки)

1020

1.8

Прогнозируемое потребление в США было основано на тех же максимальных уровнях употребления в 11 категориях пищевых продуктов (Таблица 4) и потреблении этих пищевых продуктов в США по результатам диетического обследования в 199496 (Министерство сельского хозяйства США, 1998 г.) . В этом трехлетнем национальном опросе данные были собраны из двух 24-часовых отзывов репрезентативных домохозяйств. Прогнозируемое потребление трегалозы детьми, подростками и взрослыми показано в таблице 5. Для взрослых прогнозируемое потребление трегалозы для всех предложенных применений, кроме жевательной резинки, составило 7.2 г / день при среднем потреблении и 16 г / день при 90-м процентиле. Прогнозируемое среднее потребление при приеме пищи (исключая случаи длительного приема пищи) варьировалось от 3,9 до 9,7 г за один прием, в то время как прогнозируемое потребление для 90-го процентиля варьировалось от 7,6 до 19 г за один прием. Самый высокий прогнозируемый уровень потребления от отдельного продукта питания был связан с потреблением мороженого. Потребление жевательной резинки оценивалось отдельно, поскольку потребление этого продукта не было включено в исследование, а было основано на почтовом опросе 1500 человек в 1995 году, которые сообщили о своем дневном потреблении обычной жевательной резинки и жевательной резинки без сахара.Предполагалось, что трегалоза составляет 10% от общей массы жевательной резинки из-за ее использования в качестве негигроскопичного подсластителя в покрытии. Прогнозируемое среднее потребление при употреблении жевательной резинки составило 0,4 г / день, а для 90-го процентиля потребления - 0,8 г / день (Murphy & Kruger, 2000).

Таблица 4. Пищевое использование трегалозы и максимальные уровни использования в США

Пищевая категория

Концентрация трегалозы (%)

Максимальный уровень использования (%)

Пекарский крем

2025

56

Кондитерские изделия

7

Файлы cookie

10

Карамель

20

Мороженое

10

Обледенение

25

5

Лапша быстрого приготовления / рис

2

Обработанные фрукты
(джемы, начинки, начинки)

1020

Реструктурированные морепродукты

10

Бисквит

810

Сахарные покрытия

50

10

Таблица 5.Прогнозируемое потребление трегалозы в результате всех предлагаемых видов использования с пищей населением США

Возрастная группа (лет)

Повод для еды

Количество случаев использования

Потребление на пользователя (г)

Среднее

90-й процентиль

Детский (212)

в сутки

3251

5.2

11

Завтрак

3,6

5,8

Обед

1072

4,1

7.8

Ужин

482

4,8

9,2

Закуска

2038

3,7

7,5

Другое

53

5.8

12

Подростки (1319)

в сутки

866

7,5

15

Завтрак

221

5,1

10

Обед

207

6.6

12

Ужин

122

7,1

17

Закуска

589

5,2

9,9

Другое

17

5.9

10

Взрослые (

20)

в сутки

6384

7,2

16

Завтрак

2142

3,9

7.6

Обед

1277

6,1

15

Ужин

1485

8,1

19

Закуска

3084

5.5

12

Другое

121

9,7

16

Таким образом, прогнозируемое среднее потребление трегалозы австралийскими потребителями колебалось от 6,5 до 11 г / день; прогнозируемое суточное потребление (включая жевательную резинку) взрослыми потребителями в 90-м процентиле в США было <17 г / день, в то время как потребление за один раз в 90-м процентиле могло достигать 19 г.Комитет отметил, что модели прогнозирования дают завышенные оценки потребления трегалозы, поскольку они предполагают, что все продукты в названных категориях использования содержат трегалозу на максимальных уровнях. Кроме того, прогнозируемое количество потребляемых продуктов завышено из-за использования записей о питании за 24 часа в обследованиях потребления пищевых продуктов как в Австралии, так и в США, которые, как правило, завышают привычное потребление продуктов (Институт европейских исследований, 1998).

4. КОММЕНТАРИИ

Трегалоза гидролизуется до глюкозы с помощью фермента треалазы, который находится в слизистой оболочке кишечника, а небольшое количество интактной трегалозы, которая может абсорбироваться, метаболизируется треалазой в плазме крови, печени или почках.Дефицит треалазы был выявлен у некоторых людей, но его распространенность, по-видимому, очень низкая в большинстве популяций, за возможным исключением Гренландии, где сообщается о 8% распространенности.

Исследования, в которых трегалоза вводилась с пищей, были выполнены на мышах и собаках. В трехмесячном исследовании на мышах незначительные спорадические изменения в клинической биохимии наблюдались у самцов при самой высокой испытанной дозе, 7,3 г / кг массы тела в день, но не было никаких свидетельств патологических изменений.В 14-дневном исследовании на собаках не было обнаружено никаких клинических или морфологических доказательств токсичности при дозе 5 г / кг м.т. в день, что является самой высокой испытанной дозой.

В исследовании двух поколений на крысах не было обнаружено никакого влияния на воспроизводство. Аналогичным образом, в исследованиях токсичности для развития у крыс и кроликов не было доказательств тератогенности. Результаты анализов на генотоксичность были отрицательными. Нет доступных долгосрочных исследований, но они были сочтены ненужными, поскольку трегалоза быстро метаболизируется до глюкозы на уровнях потребления, прогнозируемых на основе предлагаемых применений.

Имеющиеся токсикологические данные по ферментам, используемым при получении трегалозы, некоторые из которых были оценены Комитетом ранее, не вызывают никаких опасений.

Исследования на людях показывают, что трегалоза хорошо переносится. Повышенная частота мальабсорбции и желудочно-кишечных симптомов отмечалась у лиц, принимавших разовые дозы 20 г и более. В ограниченных данных о лицах с известным или предполагаемым дефицитом треалазы единственными наблюдаемыми эффектами были желудочно-кишечные эффекты, ожидаемые от непереваренного дисахарида.

Ежедневное потребление трегалозы было спрогнозировано на основе консервативных предположений путем сочетания наивысших предложенных уровней использования. Для взрослых в США среднее прогнозируемое потребление от всех предложенных видов использования, за исключением жевательной резинки, составляло 7 г / день, а для потребителей 90-го процентиля - 16 г / день. Среднее потребление за один прием пищи составляло от 4 до 10 г, в то время как потребление потребителями в 90-м процентиле колебалось от 8 до 19 г за один раз. Среднестатистические пользователи жевательной резинки и те, кто находится на 90-м процентиле употребления, проглотят 0.4 и 0,8 г / сут трегалозы соответственно. Для взрослых австралийцев прогнозируемое среднее потребление трегалозы (включая жевательную резинку) составляло от 6 до 10 г / день. Однако данные по Австралии и США были основаны на краткосрочном отзыве о питании, что, как правило, приводит к завышению оценок привычного потребления.

5. ОЦЕНКА

На основе имеющейся информации Комитет установил ADI для трегалозы, не указан 2 .

6. ССЫЛКИ

Арола, Х., Koivula, T., Karvonen, A.-L., Jokela, H., Ahola, T. & Isokoski, M. (1999) Низкая активность треалазы связана с абдоминальными симптомами, вызванными съедобными грибами. Сканд. J. Gastroenterol., 34 , 898903.

Аткинсон, Дж. Э. и Томас, Б. Дж. (1994a) Исследование острой токсичности трегалозы у мышей-альбиносов. Неопубликованный отчет № 434 из Исследовательского центра Фредерика, Фредерик, Мэриленд, США. Представлено в ВОЗ компанией Bioresco Ltd, Швейцария.

Аткинсон, Дж.E. & Thomas, B.J. (1994b) Исследование острой токсичности трегалозы на крысах-альбиносах. Неопубликованный отчет № 435 из Исследовательского центра Фредрика, Фредерик, Мэриленд, США. Представлено в ВОЗ компанией Bioresco Ltd, Швейцария.

Аткинсон, Дж. Э. и Томас, Б. Дж. (1994c) Исследование острой токсичности трегалозы у гончих собак. Неопубликованный отчет № 436 из Исследовательского центра Фредерика, Фредерик, Мэриленд, США. Представлено в ВОЗ компанией Bioresco Ltd, Швейцария.

Аткинсон, Дж. Э. и Томас, Б.J. (1994d) Исследование острого раздражения глаз трегалозой у новозеландских белых кроликов (Исследование № 458). Неопубликованный отчет № 458 из Исследовательского центра Фредерика, Фредерик, Мэриленд, США. Представлено в ВОЗ компанией Bioresco Ltd, Швейцария.

Аткинсон, Дж. Э. и Томас, Б. Дж. (1994e) 14-дневное исследование токсичности трегалозы у мышей-альбиносов. Неопубликованный отчет № 459 из Исследовательского центра Фредерика, Фредерик, Мэриленд, США. Представлено в ВОЗ компанией Bioresco Ltd, Швейцария.

Аткинсон, Дж.E. & Thomas, B.J. (1994f) 14-дневное исследование токсичности трегалозы у гончей (Исследование № 460), неопубликованный отчет № 460 Исследовательского центра Фредерика, Фредерик, Мэриленд, США. Представлено в ВОЗ компанией Bioresco Ltd, Швейцария.

Австралия - Управление по контролю за продуктами питания Новой Зеландии (2000) Прогнозирование потребления трегалозы на основе национальных данных о потреблении продуктов питания. Неопубликованные данные, представленные в ВОЗ Управлением по контролю за продуктами питания Австралии и Новой Зеландии.

Bergoz, R. (1971) Мальабсорбция трегалозы, вызывающая непереносимость грибов.Гастроэнтерология, 60 , 912.

Bergoz, R., Bolte, J.P. & Meyer zum Bueschenfelde, K.-H. (1973) Тест толерантности к трегалозе. Сканд. J. Gastroenterol., 8 , 657663.

Bergoz, R., Vallotton, M.-C. И Луазо, Э. (1982) Дефицит треалазы. Аня. Nutr. Метаб., 26 , 1.

Bolte, J.P., Schönhage, F., Förster, E., Knolle, J. & Meyer zum Büschenfelde, K.H. (1973) [Тест на толерантность к трегалозе при синдромах мальабсорбции.] Dtsch. мед. Wschr., 98 , 13581362 (на немецком языке).

Cerda, J.J., Preiser, H. & Crane, R.K. (1972) Ферменты на границе кисти и мальабсорбция: повышенное содержание дисахаридов при хронической недостаточности поджелудочной железы с сахарным диабетом. Гастроэнтерология, 62 , 841.

Dahlqvist, A. (1974) Дефицит ферментов и мальабсорбция углеводов. В: Sipple, H.L & McNutt, K.W., eds, Sugars in Nutrition, New York: Academic Press, pp. 187214.

.

ван Делфт, J.H.M. (1999) Тест обратной бактериальной мутации с изоамилазой. Неопубликованный отчет № V99.526 от TNO Nutrition and Food Research Institute, Зейст, Нидерланды. Представлено в ВОЗ компанией Bioresco Ltd, Швейцария.

Demelier, J.-F., Labat, J. & Courtois, J.-E. (1975) [Влияние парентеральной инъекции трегалозы на млекопитающих с использованием различного оборудования для трегалозы.] C.R. Acad. Sc. (Париж) Серия D, 280 , 669672 (на французском языке).

ван Элбург, Р.М., Уил, Дж. Дж., Кокке, Ф.Т.М., Малдер, А.М., ван де Брук, W.G.M., Малдер, К.Дж.Дж. И Хейманс, H.S.A. (1995) Повторяемость теста на всасывание сахара с использованием лактулозы и маннита для измерения кишечной проницаемости для сахаров. J. Pediatr. Гастроэнтерол. Нутр., 20 , 184188.

Eze, L.C. (1989) Активность треалазы в плазме и сахарный диабет. Biochem. Ген., 27 , 487495.

Garland, G. (1989) У млекопитающих сукраизомальтаза, мальтазеглюкоамилаза и треалаза мембраны щеточной каймы.Комп. Biochem. Physiol., 94B , 111.

Gudmand-Høyer, E. & Skovbjerg, H. (1996) Расщепление дисахаридов и нарушение пищеварения. Сканд. J. Gastroenterol., 31 (Приложение 216), 111121.

Gudmand-Høyer, E., Fenger, H.J., Skovbjerg, H., Kernhansen, P. & Rørbaek Madsen, P. (1988) Дефицит треалазы в Гренландии. Сканд. J. Gastroenterol., 23 , 775778.

van Handel, E. (1969) Функционируют ли трегалоза и треалаза в транспорте глюкозы почками? Наука, 163 , 10751076.

van Handel, E (1970) Треалаза сыворотки: анализ и нормальные значения. Clin. Чим. Acta, 29 , 349353.

Heine, W., Mohr, C. & Münch, C. (1996) [Сахар как субстрат для водородных дыхательных тестов: корреляция с дозировкой, временем прохождения через рот, микрофлорой и побочными эффектами.] Pädiatr. Grenzgeb., 34 , 481490 (на немецком языке).

Hietanen, E. (1973) Межвидовые различия в уровнях кишечной щелочной фосфатазы, аденозинтрифосфатазы и дисахаридаз.Комп. Biochem. Physiol., 46A , 359369.

Хор П. и Мессер М. (1968) Исследования дисахаридазной активности тонкого кишечника домашней кошки и других хищных млекопитающих. Комп. Biochem. Physiol., 24 , 717725.

Институт европейских исследований (1998) Влияние продолжительности исследования на оценку потребления пищевых химикатов, Отчет IEFS № 3.

Китчинг, Дж. (1995) Анализ бактериальной мутации трегалозы (кристалл). Неопубликованный отчет Huntingdon Research Center Ltd, Хантингдон, Соединенное Королевство.Представлено в ВОЗ Ассоциацией производителей ароматизаторов и экстрактов США.

Labat-Robert, J. (1982) Trehalases. В: Lee, C.K. И Линдли, М.Г., ред., Разработка пищевых углеводов, т. 3, Disaccharidases, Лондон: Издательство прикладных наук, стр. 84106.

Лина, Б.А.Р. (1999) Исследование субхронической (13 недель) пероральной токсичности изомилазы на крысах. Неопубликованный отчет № V99.646 от TNO Nutrition and Food Research Institute, Зейст, Нидерланды. Представлено в ВОЗ Ассоциацией производителей ароматизаторов и экстрактов США.

Madzarovová-Nohejlova, J. (1973) Дефицит трехалазы в семье. Гастроэнтерология, 65 , 130133.

Maestracci, D. (1976) Ферментативная солюбилизация ферментов мембран щеточной каймы кишечника человека. Биохим. Биофи. Acta, 433 , 469481.

McRae, L.A. (1995) Кристаллы трегалозы. Острая пероральная токсичность для крыс. Неопубликованный отчет Huntingdon Research Center Ltd, Хантингдон, Соединенное Королевство. Представлено в ВОЗ компанией Bioresco Ltd, Швейцария.

Моримото, Х., Норо, Х. и Отаки, Х. (1979) Тест на острую токсичность изоамилазы (происхождения Pseudomonas amyloderamosa). Неопубликованный отчет № 12110175-3 из Японских исследовательских лабораторий пищевых продуктов, Токио, Япония. Представлено в ВОЗ компанией Bioresco Ltd, Швейцария.

Мерфи, М. И Крюгер, К. (2000) Расчетное потребление трегалозы в США основано на предлагаемых уровнях использования в 11 категориях пищевых продуктов. Неопубликованный отчет Environ Corp., представленный в ВОЗ компанией Bioresco Inc., Швейцария.

Мюррей, И.А., Коупленд, К., Смит, Дж., Анселл, Д., Лонг, Р.Г. (2000) Кишечная треалаза в популяции Великобритании: установление нормального диапазона и влияние болезни. Br. J. Nutr., 83 , 241245.

Накада, Т., Марута, К., Мицузуми, Х., Кубота, М., Чаен, Х., Сугимото, Т., Куримото, М., Цудзисака, Ю. (1995a) Очистка и характеристика нового фермента , мальтоолигозил трегалоза трегалогидролаза, из Arthrobacter sp. В36.Biosci. Биотех. Biochem., 59 , 22152218.

Накада, Т., Марута, К., Цусаки, К., Кубота, М., Чаен, Х., Сугимото, Т., Куримото, М., Цудзисака, Ю. (1995b) Очистка и свойства нового фермента , мальтоолигозил трегалозосинтаза, из Arthrobacter sp. В36. Biosci. Биотех. Biochem., 59 , 22102214.

Niederst, C. & Dauça, M. (1985) [Активность почечных гидролаз во время пре- и постнатального развития мышей.] Can. J. Physiol.Pharmacol., 63 , 731734 (на французском языке).

Oku, T. & Okazaki, M. (1998) Преходящий слабительный порог трегалозы и лактулозы у здоровых женщин. J. Nutr. Sci. Витаминол., 44 , 787798.

Pointner, H., Flegel, U., Bayer, P.M. И Шмидт П. (1974) [Тест на толерантность к трегалозе в исследовании кишечной абсорбции у пациентов с уремией, находящихся на периодическом гемодиализе.] Wien. Клин. Wschr., 22 , 6 (на немецком языке).

Риби, Дж., Саншайн, С. & Кретчмер, Н. (1990) Почечная треалаза: функция и развитие. Комп. Biochem. Physiol., 95A , 9599.

Руппин Х., Домшке В., Домшке С. и Классен М. (1974) [Активность кишечной дисахаридазы при ювенильном сахарном диабете] Клин. Wschr., 52 , 568570 (на немецком языке).

Sato, S., Okamoto, K., Minami, R., Kohri, H. & Yamamoto, S. (1999) Трегалоза может использоваться в качестве парентерального источника сахаридов для кроликов. J. Nutr., 129 , 158164.

Schmid, H., Biedermann, K., Luetkemeier, H., Weber, K. & Wilson, J. (1998) Субхроническое 13-недельное исследование пероральной токсичности (кормления) с трегалозой на мышах. Неопубликованный отчет (RCC Project 639213) от Research Consulting Company, Иттинген, Швейцария. Представлено в ВОЗ компанией Bioresco Ltd, Швейцария.

Министерство сельского хозяйства США (1998 г.) Продолжающееся исследование потребления пищевых продуктов отдельными лицами и Исследование знаний о питании и здоровье 199496, Вашингтон, округ Колумбия: Национальная служба технической информации.

Ushijima, K., Fujisawa, T. & Kretchmer, N. (1995) Исследование переваривания и всасывания трегалозы в кишечнике человека. Копать. Абсорп., 18 , 5657.

Waalkens-Berendsen, D.H. (1998) Исследование пероральной эмбриотоксичности / тератогенности трегалозы у крыс. Неопубликованный отчет № V98.551 от TNO Nutrition and Food Research Institute, Зейст, Нидерланды. Представлено в ВОЗ компанией Bioresco Ltd, Швейцария.

Валлийский, Дж. Д., Полей, Дж. Р., Бхатиа, М., Стеренсон, Д.E. (1978) Активность кишечных диссахаридаз в зависимости от возраста, расы и повреждения слизистой оболочки. Гастроэнтерология, 75 , 847855.

Winegar, R.A. (1997a) Оценка трегалозы в анализе хромосомной аберрации СНО. Неопубликованный отчет № G018-97 от SRI International, Менло-Парк, США. Представлено в ВОЗ компанией Bioresco Ltd, Швейцария.

Winegar, R.A. (1997b) Оценка трегалозы в анализе микроядер мыши. Неопубликованный отчет № G019-97 от SRI International, Менло-Парк, США.Представлено в ВОЗ компанией Bioresco Ltd, Швейцария.

Wolterbeek, A.P.M. & Waalkens-Berendsen, D.H. (1999a) Исследование репродукции двух поколений с использованием трегалозы на крысах. Неопубликованный отчет № V99.280 от TNO Nutrition and Food Research Institute, Зейст, Нидерланды. Представлено в ВОЗ компанией Bioresco Ltd, Швейцария.

Wolterbeek, A.P.M. & Waalkens-Berendsen, D.H. (1999b) Исследование пероральной эмбриотоксичности / тератогенности трегалозы на новозеландских белых кроликах. Неопубликованный отчет №V98.797 от TNO Nutrition and Food Research Institute, Зейст, Нидерланды. Представлено в ВОЗ компанией Bioresco Ltd, Швейцария.

Йошида, К. (1993) Активность треалазы сыворотки у пациентов с ревматоидным артритом. Clin. Чим. Acta, 215 , 123124.

Примечания

1

ADI "не указано" используется для обозначения пищевого вещества с очень низкой токсичностью, которое на основании имеющихся данных (химических, биохимических, токсикологических и других) и общего потребления вещества с пищей, возникающего из его использование в количествах, необходимых для достижения желаемого эффекта, и от его приемлемых фоновых уровней в пищевых продуктах, по мнению Комитета, не представляет опасности для здоровья.По этой причине и по причинам, указанным в индивидуальной оценке, установление ADI, выраженного в числовой форме, не считается необходимым.